農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將PSY基因轉(zhuǎn)入玉米自交系的研究.pdf

1、維生素A缺乏被世界衛(wèi)生組織列為世界四大營(yíng)養(yǎng)缺乏病之一。玉米作為世界上分布面積最廣泛的糧食作物之一，卻不含維生素A，以其為主食遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足人體對(duì)維生素A的需要。因此玉米中維生素A的提高，將極大的改善貧困地區(qū)人群營(yíng)養(yǎng)狀況。通過(guò)轉(zhuǎn)基因方法提高玉米中維生素A的含量是一條經(jīng)濟(jì)而切實(shí)可行的方法。
　　 本論文以類胡蘿卜素合成途徑中的重要關(guān)鍵酶八氫番茄紅素合成酶(PSY，phytoene synthase)為目的基因，旨在通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將P

2、SY基因轉(zhuǎn)入玉米優(yōu)良自交系，以獲得高維生素A原含量的轉(zhuǎn)基因玉米新品質(zhì)。目的基因PSY來(lái)源于草原龍膽，將其插入帶有35S啟動(dòng)子和bar基因篩選標(biāo)記的表達(dá)載體pCAMBIA2300中，構(gòu)建了植物表達(dá)載體，并轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌C58中獲得了工程農(nóng)桿菌。實(shí)驗(yàn)中以優(yōu)良玉米自交系7922，238，265，p138等的幼胚為材料，接種在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)以獲得愈傷組織。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，幼胚大小在1～2mm，幼胚接種時(shí)盾片向上放置，愈傷誘導(dǎo)率較高。此外，愈傷的誘導(dǎo)

3、受基因型和培養(yǎng)基成分的顯著影響。7922，238和265的二型愈傷可長(zhǎng)期繼代并再生出植株，培養(yǎng)基中添加半胱氨酸和硝酸銀能顯著降低愈傷的褐化率。用農(nóng)桿菌C58介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化7922，238等的二型愈傷，在轉(zhuǎn)化前對(duì)愈傷的抗性進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)草丁膦(L-phosphiothricin，PPT)濃度在5mg/t，時(shí)，愈傷有80％死亡，所以將篩選濃度定為5mg/L。對(duì)影響農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化效率的因素進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)侵染時(shí)間在15min，共培培養(yǎng)基中添加葡萄糖和