利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將PTA和反義Wx雙基因?qū)胨镜难芯?pdf

1、本實(shí)驗(yàn)結(jié)合根癌農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，將構(gòu)建于同一載體上的水稻反義蠟質(zhì)基因和半夏凝集素基因?qū)胨?，希望利用反義蠟質(zhì)基因的干擾，降低蠟質(zhì)基因的表達(dá)量，從而下調(diào)稻米胚乳中直鏈淀粉含量的同時也提高水稻的抗蟲性。這為同時改良水稻多個性狀提供了一種新的途徑。本實(shí)驗(yàn)主要獲得了以下研究結(jié)果： 1.分別以不同材料的幼胚作為遺傳轉(zhuǎn)化受體，獲得了一批轉(zhuǎn)水稻反義蠟質(zhì)基因和半夏凝集素基因的潮霉素抗性植株。 2.對潮霉素抗性植株的PCR檢測結(jié)果表明大多數(shù)

2、抗性植株其選擇標(biāo)記基因與外源目的基因共整合，少數(shù)植株只整合了選擇標(biāo)記基因和其中的一個目的基因，還有的個別植株只整合進(jìn)了選擇標(biāo)記基因而無目的基因。 3.對隨機(jī)抽取的PCR檢測雙陽性植株進(jìn)行Southernblotting雜交檢測分析表明：水稻反義蠟質(zhì)基因和半夏凝集素基因均已整合到轉(zhuǎn)基因水稻的基因組中，且目的基因基本上都是以低拷貝的方式整入。 4.對PTA基因進(jìn)行RT-PCR分析，結(jié)果表明PTA基因在轉(zhuǎn)錄水平上得到了表達(dá)。

3、 5.將轉(zhuǎn)基因植株T1代自交種子成熟胚滅菌后接種在加有潮霉素的1/2MS培養(yǎng)基上進(jìn)行潮霉素抗性發(fā)芽實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明：隨機(jī)抽取的10個轉(zhuǎn)基因株系中有9個株系T1代植株的自交種子潮霉素抗感分離比符合3：1，遵循孟德爾單基因顯性遺傳規(guī)律。 6.為了檢測反義蠟質(zhì)基因是否確已起到下調(diào)水稻胚乳直鏈淀粉含量的作用，隨機(jī)抽取各陽性獨(dú)立轉(zhuǎn)化株(以中花9號和日本晴為例)按農(nóng)業(yè)部頒布的簡化法進(jìn)行T1代成熟種子胚乳中直鏈淀粉含量的測定。結(jié)果表明：不