蘇云金芽孢桿菌中脂肽類抗生素Iturins的研究.pdf

1、多種芽孢桿菌尤其是枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)在生長代謝過程中能夠產(chǎn)生不同種類的抗菌物質(zhì),包括非核糖體合成的脂肽類抗生素(lipopeptide antibiotics)生物表面活性素(surfactin)、豐原素(fengycin)和伊枯草菌素(iturin)等。其中的iturin家族類抗生素在農(nóng)業(yè)、生物防治、醫(yī)學等方面得到越來越廣泛的應(yīng)用。本研究嘗試利用PCR、真菌抑制實驗和HPLC等三種方法來鑒別生產(chǎn)itur

2、in的菌株,以期從與枯草芽孢桿菌親緣關(guān)系相近但目前尚未發(fā)現(xiàn)產(chǎn)iturin家族類抗生素的蘇云金芽孢桿菌中發(fā)現(xiàn)生產(chǎn)iturinA等具有抗菌作用的脂肽類抗生素的菌株。
　　 利用GenBank上已登錄的ituD序列設(shè)計引物,以本實驗室保存的蘇云金芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌和蠟質(zhì)芽孢桿菌等菌株的總DNA為模板進行PCR擴增,獲得了9株P(guān)CR陽性菌株。對克隆得到的ituD基因進行測序及Blast序列分析,結(jié)果表明,所克隆的基因

3、與GenBank上已登錄iturin家族脂肽抗生素的基因具有95％以上的同源性。對這9株菌株的的發(fā)酵液經(jīng)過酸沉淀、甲醇抽提等步驟獲得脂肽類粗提物,并進行抑制香蕉炭疽病菌(Colletotrichum musae)、黃瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum)、灰葡萄孢霉(Botrytiscinerea)和水稻紋枯病菌(Rhizoctonia solani)等常見植物病原真菌的測定。結(jié)果表明,所提取的脂肽類粗提物中,枯草芽孢桿菌E

4、PL8、解淀粉芽孢桿菌TB2對4種真菌菌絲生長均有較強的抑制作用,枯草芽孢桿菌BS1對Colletotrichum musae和Botrytiscinere菌絲生長有抑制作用,而蘇云金芽孢桿菌BRC-XQ16則對Colletotrichum musae菌絲生長具有抑制作用。
　　 將對部分真菌菌絲具有抑制作用的這4株菌的脂肽粗提物純化后經(jīng)過反相HPLC分析,結(jié)果表明,EPL8和TB2脂肽類提取物中,峰值最高的3個組分與itufi

5、nA標準樣品有相對應(yīng)的接近的峰,據(jù)此推測EPL8和TB2中的脂肽類提取物中可能存在與iturirLA結(jié)構(gòu)類似的組分。BS1的脂肽提取物中峰值最高的組分保留時間幾乎與iturinA標準樣品中的同樣峰值最高的保留時間相一致,據(jù)此推測該組分很可能就是iturinA標準樣品中含量最高的組分。BRC-XQ16中峰值最高的2個組分保留時間與iturinA標準樣品中的前2個組分保留時間相近,同樣推測,BRC-XQ16中的這2種組分結(jié)構(gòu)也類似ituri