茶褐斑擬盤多毛孢對山茶致病機理的研究.pdf

1、本試驗以茶褐斑擬盤多毛孢[Pestalotiopsis guepinii(Desm.)Stey]和園林綠化常用的山茶品種七心紅(Camellia pitardii)為試材，對茶褐斑擬盤多毛孢菌產(chǎn)生的致病相關(guān)因子--毒素和細(xì)胞壁降解酶進(jìn)行了多方面的研究。篩選出了茶褐斑擬盤多毛孢產(chǎn)毒的最佳培養(yǎng)條件，并對粗毒素的理化性質(zhì)作了進(jìn)一步的研究；對茶褐斑擬盤多毛孢在活體內(nèi)外產(chǎn)生的細(xì)胞壁降解酶種類、活性及其動態(tài)變化進(jìn)行了測定，并對細(xì)胞壁降解酶的動力學(xué)特

2、性進(jìn)行了研究；通過毒素和細(xì)胞壁降解酶對山茶葉片各項生理生化指標(biāo)的影響，探索了茶褐斑擬盤多毛孢對山茶的致病機理。主要研究結(jié)果如下：
　　 1.茶褐斑擬盤多毛孢在供試的液體培養(yǎng)基中可以產(chǎn)生對山茶有毒性作用的毒素，對茶褐斑擬盤多毛孢菌的產(chǎn)毒培養(yǎng)條件的研究表明，該病菌的最佳產(chǎn)毒培養(yǎng)基是Fries培養(yǎng)基，最佳產(chǎn)毒培養(yǎng)條件是：25℃、培養(yǎng)液初始pH5.0、連續(xù)光照、振蕩培養(yǎng)15d。
　　 2.用Fries培養(yǎng)基在最佳培養(yǎng)條件下培養(yǎng)出

3、的茶褐斑擬盤多毛孢菌濾液制備成粗毒素，通過檢測證明此粗毒素具有較強的熱穩(wěn)定性；對pH敏感，耐酸堿能力較差，pH5.0時毒素致病活性最強；茶褐斑擬盤多毛孢粗毒素中具有生物活性的成分大多是極性較大的物質(zhì)。
　　 3.茶褐斑擬盤多毛孢在活體內(nèi)外均能產(chǎn)生一系列細(xì)胞壁降解酶，其中木聚糖酶、果膠甲基半乳糖醛酸酶(PMG)、β-1，4-內(nèi)切葡聚糖酶(Cx)、β-葡萄糖苷酶在活體內(nèi)外的活性都較高，在致病過程中這幾種酶起著重要作用；而漆酶在活體內(nèi)

4、外的活性都很低，在致病過程中的作用較小。
　　 4.對木聚糖酶、PMG、Cx和β-葡萄糖苷酶的動力學(xué)特性研究表明，PMG和Cx酶活反應(yīng)的最適溫度為50℃，β-葡萄糖苷酶和木聚糖酶反應(yīng)的最適溫度為60℃；Cx、β-葡萄糖苷酶和木聚糖酶的最適pH均為5.0，PMG的最適pH為5.0～6.0，說明4種酶均傾向于弱酸性環(huán)境；Cx、PMG和木聚糖酶隨著反應(yīng)時間的延長酶活性下降，而β-葡萄糖苷酶活性隨反應(yīng)時間的延長先急劇升高后緩慢下降；4種

5、細(xì)胞壁降解酶的最大反應(yīng)速度從大到小依次為木聚糖酶、PMG、β-葡萄糖苷酶、Cx，它們和相應(yīng)底物的親和力由弱到強順序為PMG、Cx、木聚糖酶、β-葡萄糖苷酶。
　　 5.生理生化測定表明，茶褐斑擬盤多毛孢的致病性是毒素和細(xì)胞壁降解酶協(xié)同作用的結(jié)果。毒素和酶協(xié)同作用對山茶膜系統(tǒng)的損傷最大，毒素對細(xì)胞膜的損傷次之，果膠酶、纖維素酶和木聚糖酶主要在病害擴展過程中起輔助作用；毒素在對山茶葉綠體的破壞中起主導(dǎo)作用；毒素和細(xì)胞壁降解酶均能在損