石楠擬盤多毛孢(Pestalotiopsis photiniae)次級(jí)代謝產(chǎn)物DMMP抗腫瘤機(jī)理的初步研究.pdf

1、DMMP(4-(3',3'-dimethylallyloxy)-5-methyl-6-methoxyphthalide)，是從石楠擬盤多毛孢菌(Pestalotiopsis photiniae)次級(jí)代謝產(chǎn)物中分離得到的酚肽類化合物。利用MTT比色法計(jì)算其對(duì)細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度(IC50)，結(jié)果得出 DMMP對(duì) HeLa、MCF7、MDA-MB-231和MRC5的IC50分別為36、54、78和123μg/mL，對(duì)人宮頸癌HeLa細(xì)胞的抑制

2、性最強(qiáng)，而人胚肺成纖維細(xì)胞MRC5對(duì)DMMP最不敏感。DMMP對(duì)HeLa不同時(shí)間的IC50分別為24h：36μg/mL、48h：22μg/mL、72h：13μg/mL。通過MTT法檢測(cè)DMMP抗腫瘤活性可知DMMP作用細(xì)胞具有一定的細(xì)胞選擇性，并且有時(shí)間依賴性和劑量依賴性。DAPI染色觀察細(xì)胞核形態(tài)變化，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞出現(xiàn)凋亡特征。JC-1染色結(jié)果顯示DMMP可以誘導(dǎo)HeLa細(xì)胞線粒體膜電位發(fā)生變化。又通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)了DMMP作用后的He

3、La細(xì)胞的凋亡情況，發(fā)現(xiàn)DMMP可以促進(jìn)細(xì)胞早期凋亡的發(fā)生，并且將HeLa細(xì)胞周期抑制在G1/S期。用Western blot免疫印記法和實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)線粒體通路相關(guān)蛋白發(fā)現(xiàn)截短型Caspase9、Caspase3和AIF蛋白均出現(xiàn)表達(dá)量升高的現(xiàn)象，因此可以證實(shí)DMMP通過線粒體凋亡途徑使HeLa細(xì)胞發(fā)生凋亡。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)可以抑制細(xì)胞周期G1/S期的p53蛋白和pRb蛋白相關(guān)信號(hào)通路中的蛋白、mRNA表達(dá)均發(fā)生變化，說明兩條信號(hào)通