小孢擬盤(pán)多毛孢的鑒定與除草活性物質(zhì)分析.pdf

1、生物除草劑符合當(dāng)代社會(huì)的農(nóng)藥發(fā)展要求，利用微生物或其代謝產(chǎn)物開(kāi)發(fā)除草劑是研發(fā)生物除草劑的重要途徑。本試驗(yàn)從發(fā)病毛竹葉片上分離得到一株具有高除草活性的真菌菌株，并對(duì)其除草活性物質(zhì)進(jìn)行了研究，結(jié)果如下: ①通過(guò)致病性分析，發(fā)現(xiàn)分離的真菌可以再次侵染毛竹，而且發(fā)病癥狀與分離時(shí)相同，證明該真菌是毛竹的致病菌。利用該菌株進(jìn)行液體培養(yǎng)，提取粗毒素，并通過(guò)生物測(cè)定發(fā)現(xiàn)該菌的粗毒素具有很強(qiáng)的除草活性。 ②通過(guò)菌落特征、分生孢子形態(tài)及萌發(fā)

2、部位等形態(tài)學(xué)特征和云南農(nóng)業(yè)大學(xué)張忠義教授的鑒定，確定該菌為擬盤(pán)多毛孢屬真菌。然后提取了該菌的DNA，采用通用引物ITS1和ITS4進(jìn)行擴(kuò)增，獲得550bp的片段，并提交到GenBank，獲得登陸號(hào)EU279435。將該菌株的ITS序列在網(wǎng)上進(jìn)行同源性比較，發(fā)現(xiàn)該菌的ITS與擬盤(pán)多毛孢屬真菌的ITS高度相似，均達(dá)到95％以上，其中與Pestalotiopsis microspora的同源性達(dá)到100％，最終確定該菌為小孢擬盤(pán)多毛孢。

3、 ③通過(guò)對(duì)瓜果腐霉的AP1菌株、灰葡萄孢的BC4菌株和小孢擬盤(pán)多毛孢的PM1菌株進(jìn)行生物測(cè)定，發(fā)現(xiàn)以小孢擬盤(pán)多毛孢的PM1除草活性最佳，最后選定該菌株為供試菌株。 ④通過(guò)對(duì)小孢擬盤(pán)多毛孢粗毒素的萃取溶劑和流程進(jìn)行摸索，發(fā)現(xiàn)利用乙酸乙酯直接萃取提取的粗毒素除草活性最好。經(jīng)過(guò)對(duì)該菌株的發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化，明確了該菌株在加入硫酸亞鐵的PD培養(yǎng)基中，15℃或30℃黑暗條件下，靜置培養(yǎng)15d，得到的除草活性物質(zhì)最多。 ⑤利用該菌株

4、的粗毒素進(jìn)行了除草譜和作物安全性試驗(yàn)，結(jié)果表明其除草活性強(qiáng)，除草譜廣，對(duì)玉米、棉花和青椒很安全，但對(duì)大豆、黃瓜、西紅柿等作物有一定影響。利用樹(shù)脂柱、TLC方法對(duì)粗毒素進(jìn)行分離純化，得到一個(gè)高除草活性的組分6；然后再利用HPLC方法對(duì)組分6進(jìn)行分離純化，得到了一個(gè)純度很高的單一除草活性組分Ⅲ。 ⑥對(duì)該菌的粗毒素進(jìn)行了劑型的初步探索，制作了粗毒素的水劑。通過(guò)對(duì)該粗毒素水劑的室溫、-20℃和54℃貯藏的穩(wěn)定性分析，發(fā)現(xiàn)20％、30％、