交織頂孢霉保肝物質(zhì)的分離純化、結(jié)構(gòu)鑒定與生物活性的研究.pdf

1、繼交織頂孢霉(Acremoniumimplicatum(Milleretal.)Gams)菌絲體發(fā)酵研究開發(fā)和胞外、胞內(nèi)多糖的研究后,該文以對發(fā)酵產(chǎn)品的全方位有效利用為出發(fā)點(diǎn),對發(fā)酵菌絲體中保肝活性物質(zhì)進(jìn)行了研究.主要內(nèi)容包括:保肝活性物質(zhì)HG的提取分離工藝,純化技術(shù)路線,HG的理化性質(zhì),化學(xué)結(jié)構(gòu)及生物活性.通過脫脂溶劑篩選試驗(yàn)和提取正交試驗(yàn),確定了最佳提取工藝:以石油醚為脫脂溶劑,以1∶8比例加水,50℃旋轉(zhuǎn)浸提90min,離心后上清

2、液濃縮,加入95﹪乙醇醇沉至70﹪去除多糖,離心后上清液濃縮至小體積得到HG粗提物.HG純化的技術(shù)路線:HG粗提物→硅膠吸附色譜法→SephadexLH-20凝膠色譜法→高效液相色譜法→純品HG.HG初步純化采用硅膠吸附層析色譜法.選用200—300目的硅膠,洗脫劑為氯仿:乙酸乙酯:異丙醇:水=8:4:4:0.5(1﹪氨水),HG粗品dHG得率約為0.25﹪.以SephadexLH-20凝膠對HG粗dHG進(jìn)行進(jìn)一步的分離純化.對流動(dòng)相的

3、篩選試驗(yàn)結(jié)果表明,80﹪和40﹪的甲醇對目標(biāo)產(chǎn)物的分離效果相似,而80﹪甲醇的純化效果優(yōu)于100﹪甲醇,但最終均未能完全純化HG粗品,僅僅得到HG的次純品hypo-HG.在凝膠色譜純化的基礎(chǔ)上將hypo-HG用高效液相色譜進(jìn)行進(jìn)一步的純化,最終分離純化得到兩種物質(zhì)HG-1和HG-2,HG-1為主要成分,而HG-2為次要成分,得率很低.HG-1和HG-2在hypo-HG中各占比例約為90﹪、10﹪.分別采用薄層層析法、化學(xué)方法和高效液相色