球孢白僵菌殺線蟲活性物質(zhì)分離純化研究.pdf

1、沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文球孢白僵菌殺線蟲活性物質(zhì)分離純化研究姓名：劉丹丹申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：植物病理學(xué)指導(dǎo)教師：段玉璽20070601沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要本文以對(duì)甘薯莖線蟲(Ditylenchusdestructor)具有毒殺作用的球孢白僵菌(Beauveriabassiana)菌株snt90776的發(fā)酵液為材料，采用現(xiàn)代分離純化技術(shù)對(duì)殺線蟲活性組分的分離工藝進(jìn)行探索研究，取得了如下結(jié)果：1明確了球孢白僵菌srⅡ90776產(chǎn)

2、生殺線蟲活性物質(zhì)的最佳發(fā)酵時(shí)間和初步提純的方法：試驗(yàn)結(jié)果表明球孢白僵菌sn_f90776殺線蟲物質(zhì)最高產(chǎn)出量的發(fā)酵時(shí)間為8天，所獲得的發(fā)酵液活性物質(zhì)效價(jià)(ED50)為O84111g／mL。發(fā)酵液預(yù)處理研究結(jié)果表明，無(wú)水乙醇直接沉淀法能夠有效、快速、簡(jiǎn)便地除去其中大部分雜質(zhì)，為分離活性物質(zhì)奠定了基礎(chǔ)。2發(fā)酵液殺線蟲活性物質(zhì)的理化性質(zhì)進(jìn)行了系統(tǒng)研究：在捷克Doskchilova溶劑系統(tǒng)中，殺線蟲活性物質(zhì)的極性較強(qiáng)，在有機(jī)溶劑中Rf值很小，具

3、有堿性水溶性抗生素的性質(zhì)。在Betina溶劑系統(tǒng)中，將其歸為I類Ia亞類。pH層析試驗(yàn)中，隨著pH值的增大，活性物質(zhì)的Rf值也逐漸增大曲線呈S行，與堿性抗生素pH層析圖譜一致。紙電泳試驗(yàn)中，活性物質(zhì)在pH=4的緩沖液中，向負(fù)極移動(dòng)，說(shuō)明其電離后帶有正電荷；在pH=8的緩沖液中，不移動(dòng)，與電泳圖譜對(duì)照，表明殺線蟲活性物質(zhì)是弱堿性抗生素。理化性質(zhì)研究表明，該發(fā)酵液中的殺線蟲活性物質(zhì)具有耐熱、耐酸堿、耐光照、耐貯藏等特，這種殺線蟲活性物質(zhì)具有

4、生產(chǎn)和應(yīng)用上的優(yōu)勢(shì)。3對(duì)發(fā)酵液中活性物質(zhì)的分離縫化工藝進(jìn)行了大量研究，通過(guò)有機(jī)溶劑萃取、活性炭吸附層析、732陽(yáng)離子樹脂交換層析、硅膠層析、SephadexLH20層析等方法，最終獲得離純度的殺線蟲活性物質(zhì)。每個(gè)步驟都用時(shí)薯莖線蟲(Ditylenchusdestructor)作活體檢測(cè)、玻璃板點(diǎn)樣檢測(cè)、薄層層析檢測(cè)等，防治效價(jià)降低。最終分離物通過(guò)紫外一可見(jiàn)光譜掃描和高效液相色譜測(cè)定其純度達(dá)到100％。4活性物質(zhì)的殺線蟲活性測(cè)定和抑菌測(cè)定