球孢白僵菌發(fā)酵條件優(yōu)化及劑型加工工藝研究.pdf

1、本文以一株從感病僵蠶上分離出來的發(fā)酵性能優(yōu)良、對小菜蛾(Plutells xylostellsLinnaeus)具有較高毒力的球孢白僵菌(Beauveria bassiana)菌株為主要研究對象，對其最佳液體種子發(fā)酵培養(yǎng)基、固體發(fā)酵培養(yǎng)基、影響固體發(fā)酵產(chǎn)孢量的幾種因素、液體發(fā)酵條件下淀粉酶的產(chǎn)生條件、淀粉酶的酶學(xué)特性和可濕性粉劑的劑型加工工藝以及毒力測定等方面進(jìn)行了系統(tǒng)研究，為該菌株的工業(yè)化生產(chǎn)和大規(guī)模應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。 以本實驗

2、室從遼寧省農(nóng)科院蠶業(yè)研究所采集的感病僵蠶體內(nèi)篩選分離得到的一株生長速度快、產(chǎn)孢量以及毒力相對較高的球孢白僵菌為出發(fā)菌株，進(jìn)行液體種子培養(yǎng)基配方篩選、液體種子種齡和接種量對固體發(fā)酵的影響、篩選出最佳固體發(fā)酵培養(yǎng)基、并對影響固體發(fā)酵產(chǎn)孢量的溫度、料層厚度和發(fā)酵初始pH等因素進(jìn)行了考察。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：在液體種子種齡48h左右，接種量1096的時候，培養(yǎng)溫度為26℃，料層厚度為2.5-5.5cm范圍內(nèi)，pH為5.5時最適宜此球孢白僵菌菌株生長。

3、 在對球孢白僵菌液體培養(yǎng)條件下淀粉酶的產(chǎn)生及酶學(xué)性質(zhì)的研究中，主要對產(chǎn)淀粉酶的條件：如液體培養(yǎng)基配方優(yōu)化、接種量、通氣量、初始pH及培養(yǎng)時間對淀粉酶產(chǎn)量的影響，淀粉酶的酶學(xué)性質(zhì)：如溫度、pH、金屬離子對淀粉酶活力的影響及淀粉酶的熱穩(wěn)定性和pH穩(wěn)定性等方面進(jìn)行了系統(tǒng)研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)基的組分、淀粉酶反應(yīng)體系的溫度、發(fā)酵液的初始pH接種量等都是影響該菌的淀粉酶生物合成的因素。含0.5％葡萄糖、0.3％N溶性淀粉、0.5％蛋白胨和0.5

4、％酵母粉的液體培養(yǎng)基配方為最佳產(chǎn)淀粉酶培養(yǎng)基。在恒溫(25±1)℃振蕩(140r·min<'-1>)培養(yǎng)96h，接種量5％，裝液量20mL，發(fā)酵液初始pH4.0時最利于淀粉酶產(chǎn)生，產(chǎn)酶量為977U·mL<-1>。淀粉酶活性在40℃、pH4.0條件下最高，40℃處理20min后酶活保持95％以上，50℃和 60℃下處理20min后，酶活分別降低47％和89％：在pH3-8范圍內(nèi)，酶活力相對穩(wěn)定。一定濃度的Ca<'2+>有利于酶活的提高，但

5、Fe<'2+>、 Cu<'2+>、Mg<'2+>、Mn<'2+>、Na<'+>等金屬離子對酶活有不同程度的抑制。 可濕性粉劑是農(nóng)藥產(chǎn)品的基本劑型之一，可以對水噴霧使用，貯存運輸也很方便。本試驗通過正交設(shè)計試驗對各種填料、助劑的比例進(jìn)行了考察，確定了可濕性粉劑的原料配比為：球孢白僵菌原粉10％：SDS(十二烷基硫酸鈉)1％；MF(烷甲基磺酸甲醛縮合物鈉鹽)9％：抗壞血酸0.5％；最后用硅藻土補齊至100％。該制劑懸浮率可達(dá)90％以