中國(guó)被毛孢活性物質(zhì)分離純化及結(jié)構(gòu)鑒定.pdf

1、冬蟲(chóng)夏草是中國(guó)傳統(tǒng)藥物之一（Cordyceps sinensis），意為“冬天為蟲(chóng)、夏天為草”。在中國(guó)，冬蟲(chóng)夏草一般用于補(bǔ)腎、益肺、保持和提高身體的整體健康水平，并能夠治療疲勞、夜間盜汗、高血糖、高血脂、腎功能不全等疾病。由于冬蟲(chóng)夏草的獨(dú)特藥用價(jià)值，市場(chǎng)需求量不斷增加，且野生冬蟲(chóng)夏草分布地區(qū)狹窄、自然寄生率低、對(duì)生活環(huán)境條件要求苛刻，本身資源比較有限，因此，人工發(fā)酵獲得冬蟲(chóng)夏草無(wú)性型菌絲體及其活性成分，成為一種可行并可持續(xù)發(fā)展的方法。在

2、形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)的基礎(chǔ)上，中國(guó)被毛孢（Hirsutella sinensis）已證實(shí)為天然冬蟲(chóng)夏草的無(wú)性型菌株。
　　本論文圍繞中國(guó)被毛孢發(fā)酵菌絲體展開(kāi)研究。取發(fā)酵菌絲體，用超純水清洗3次，減壓抽濾，然后將菌體置于烘箱，60℃干燥至恒重。干燥后菌絲體用粉碎機(jī)搗成粉末，于4℃密封冷藏，用于接下來(lái)的研究。
　　論文首先采用凱式定氮法測(cè)得中國(guó)被毛孢發(fā)酵菌絲體中總蛋白含量為383.4 mg/g，發(fā)酵濾液中總蛋白為10.804 mg

3、/mL。氨基酸自動(dòng)分析儀測(cè)得中國(guó)被毛孢中氨基酸總含量為306.28 mg/g，比天然冬蟲(chóng)夏草(292.4 mg/g)高，其中組氨酸、精氨酸、谷氨酸含量最高，分別為40.93、36.13、28.25 mg/g。顯色法檢測(cè)得中國(guó)被毛孢菌絲體中蟲(chóng)草酸的平均含量為10.99％，并最終確定最佳提取條件為:40℃下，用超純水提取3次，每次1小時(shí)。在最優(yōu)條件下，蟲(chóng)草酸的含量為11.37％。另外，中國(guó)被毛孢中主要包括尿嘧啶、鳥(niǎo)苷、腺嘌呤、腺苷和蟲(chóng)草素等

4、核苷類(lèi)物質(zhì)，其含量分別為0.123 mg/g、0.308 mg/g、0.551mg/g、0.823 mg/g、0.308 mg/g，均在天然冬蟲(chóng)夏草含量范圍之內(nèi)。火焰原子吸收光譜法檢測(cè)出中國(guó)被毛孢發(fā)酵菌絲體中含有多種元素，其中以Na、K含量最高，分別為1582.9 mg/g、9247 mg/g，其它元素，如Mg、 Ca、Fe、Zn、Cu、Mn、Si、Ni均在天然冬蟲(chóng)夏草平均含量范圍之內(nèi)，潛在毒性元素Pb、Co、Hg均安全值之內(nèi)。

5、　　其次，采用索氏提取法從中國(guó)被毛孢發(fā)酵菌絲體中提取粗脂肪，對(duì)粗脂肪甲酯化后，氣相色譜-質(zhì)譜分析其脂肪酸組分。接著對(duì)脂肪酸類(lèi)物質(zhì)進(jìn)行分離純化，并最終確定其結(jié)構(gòu)。中國(guó)被毛孢發(fā)酵菌絲體中粗脂肪的含量為5.66％，略低于天然冬蟲(chóng)夏草中8.4％的含量。GC-MS確定其脂肪酸組分中主要包括油酸、亞油酸、棕櫚酸，不飽和脂肪酸含量為90.17％。通過(guò)分離純化得到EP-1和EP-2兩種化合物，并通過(guò)現(xiàn)代波譜技術(shù)確定其結(jié)構(gòu)，EP-1為十六烷酸即棕櫚酸，E

6、P-2為十八烯酸乙酯即油酸乙酯。
　　最后，本論文采用超聲提取法從中國(guó)被毛孢發(fā)酵菌絲體中提取多糖，經(jīng)活性炭脫色、Saveg法去蛋白得精制多糖，苯酚-硫酸法測(cè)得中國(guó)被毛孢中的總多糖含量為3.848％。利用DEAE離子交換柱、葡聚糖凝膠柱和丙烯葡聚糖凝膠柱層析分離得到兩種純化多糖。超純水洗脫部位得中性多糖HSP-1，0.1 mol/L NaCl洗脫部位得酸性多糖HSP-2。對(duì)HSP-1和HSP-2乙?；筮M(jìn)行GC-MS檢測(cè)，確定它們的