煙草內(nèi)生真菌中次級代謝產(chǎn)物及其抗腫瘤活性研究.pdf

1、植物內(nèi)生真菌具有豐富的生物多樣性，與宿主之間存在著互利共生的協(xié)同進(jìn)化關(guān)系，能產(chǎn)生與宿主相同或者相似的次級代謝產(chǎn)物。從內(nèi)生真菌的次級代謝產(chǎn)物中發(fā)掘活性優(yōu)良的天然產(chǎn)物成為目前的研究熱點(diǎn)。本論文以湖北恩施州煙草為研究對象，通過組織分離法，探究不同生育時期、不同組織部位、不同海拔高度的內(nèi)生真菌多樣性和種群結(jié)構(gòu)，并采用CCK-8（Cell Counting Kit-8）法，從獲得的內(nèi)生真菌中篩選具有抗腫瘤活性的功能菌株，然后對功能菌株進(jìn)行規(guī)模發(fā)酵

2、，從其次級代謝產(chǎn)物中分離純化具有抗腫瘤活性的單體化合物。主要試驗(yàn)結(jié)果如下:
　　1.從不同組織部位、不同生長時期、不同海拔樣地的健康煙株中分離到539株內(nèi)生真菌，鑒定為31屬73種，Shannon多樣性指數(shù)為2.78。其中，Aspergillus和Fusarium為優(yōu)勢菌群，其相對分離頻率分別為22.63％和12.99％;常見內(nèi)生真菌13屬，稀有內(nèi)生真菌16屬。不同組織、不同生育期、不同海拔中內(nèi)生真菌的多樣性差異主要體現(xiàn)在稀有屬上

3、。
　　2.根部分離到內(nèi)生真菌19個屬，莖部分離到24個屬，葉部分離到18個屬，莖部內(nèi)生真菌的多樣性高于葉部和根部，且根部出現(xiàn)6個特有屬，莖部出現(xiàn)5個特有屬，葉部僅出現(xiàn)1個特有屬，表現(xiàn)出組織專化性。
　　3.苗期分離到內(nèi)生真菌8個屬，團(tuán)棵期15個屬，旺長期21個屬，成熟期23個屬，內(nèi)生真菌多樣性隨著生育期的延長呈上升趨勢。且團(tuán)棵期出現(xiàn)1個特有屬，旺長期出現(xiàn)4個，成熟期出現(xiàn)9個，表現(xiàn)出生長?；?。
　　4.600m海拔處

4、分離到內(nèi)生真菌30個屬，1000m海拔處分離到28個屬，1300m海拔處分離到22個屬，內(nèi)生真菌的多樣性隨著海拔的升高呈遞減的趨勢。其中，600m海拔處出現(xiàn)2個特有屬，1000m海拔處出現(xiàn)1個特有屬，表現(xiàn)出海拔專化性。
　　5.20株煙草內(nèi)生真菌的發(fā)酵液粗提物對人腎癌Caki-1細(xì)胞、人肝癌HepG2細(xì)胞均具有一定的抑制活性，尤其是對于人腎癌Caki-1細(xì)胞，菌株TE-1S、TE-6L、TE-14L的PDB發(fā)酵粗提物，TE-6L、

5、TE-8L、TE-20R的大米發(fā)酵粗提物在48h內(nèi)的IC50＜40μg/mL。篩選到一株具有潛在應(yīng)用價(jià)值的菌株F.sambucinum，其PDB發(fā)酵液及大米發(fā)酵物對人腎癌Caki-1細(xì)胞48h內(nèi)IC50分別為13.28μg/mL和0.36μg/mL。
　　6.從菌株F.sambucinum的次級代謝產(chǎn)物中共分離到9個單體化合物，化合物1，7和9對人腎癌Caki-1細(xì)胞具有增殖抑制活性，其24h和48h的IC50值分別為18.24、