龍眼擬莖點(diǎn)霉細(xì)胞壁降解酶及其致病機(jī)理的研究.pdf

1、擬莖點(diǎn)霉[Phomopsis longanae Chi.]是龍眼果實(shí)潛伏侵染的主要真菌性病害之一。擬莖點(diǎn)霉在采后龍眼果實(shí)的致病過(guò)程中，會(huì)產(chǎn)生細(xì)胞壁降解酶(胞壁降解酶cell-wall degrading enzymes，CWDEs)，而細(xì)胞壁降解酶是引起植物致病的重要因子。本文以龍眼果肉上分離出的擬莖點(diǎn)霉為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，從產(chǎn)酶條件、致病作用及酚類(lèi)物質(zhì)對(duì)產(chǎn)細(xì)胞壁降解酶活性的影響等三個(gè)方面著手，研究龍眼擬莖點(diǎn)霉細(xì)胞壁降解酶的致病機(jī)理。試驗(yàn)結(jié)果如

2、下：
　　 1、采用改良的Czaper培養(yǎng)液培養(yǎng)擬莖點(diǎn)霉，所得的濾液經(jīng)離心，留上清液即粗酶液。粗酶液中可以檢測(cè)出Cx、β-葡萄糖苷酶、PG和PMG四種主要細(xì)胞壁降解酶。分別從碳源、氮源、培養(yǎng)時(shí)間、培養(yǎng)基初始pH 值、溫度等方面研究該病菌的產(chǎn)酶條件，再以培養(yǎng)時(shí)間、培養(yǎng)基最適起始pH、碳源濃度、氮源濃度為四個(gè)實(shí)驗(yàn)因素，按正交表L16(45)設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)，得出擬莖點(diǎn)霉病菌產(chǎn)細(xì)胞壁降解酶的最佳條件：培養(yǎng)時(shí)間為4d；培養(yǎng)初始pH 值為5.

3、0；碳源為1.5[％]的龍眼殼粉；氮源為0.5[％]的硝酸鉀。在此培養(yǎng)條件下，β-葡萄糖苷酶和PG活性最高，β-葡萄糖苷酶活性可達(dá)到1533.150 U/mL；PG可達(dá)到282.310 U/mL，分別是優(yōu)化前的4.5倍和1.5倍。
　　 2、擬莖點(diǎn)霉細(xì)胞壁降解酶對(duì)龍眼果皮細(xì)胞膜具有明顯的破壞作用。龍眼果實(shí)經(jīng)果膠酶、纖維素酶及果膠酶、纖維素酶混合酶處理后，龍眼果皮細(xì)胞膜透性增加，損傷影響以混合酶處理的最嚴(yán)重，損傷率高達(dá)48.37[

4、％]，而纖維素酶和果膠酶損傷率分別為40.43[％]和34.78[％]。擬莖點(diǎn)霉胞壁降解酶對(duì)龍眼果皮組織具有顯著的破壞作用，出現(xiàn)褐色、水漬狀病斑，其中以果膠酶、纖維素酶混合酶處理的破壞程度最大，果膠酶次之，纖維素酶最小。擬莖點(diǎn)霉病菌侵染龍眼果實(shí)后，在不同感病部位的果皮多聚半乳糖醛酸酶活性最強(qiáng)，但不同感病部位的果皮纖維素酶、β-葡萄糖苷酶、多聚半乳糖醛酸酶和果膠甲基半乳糖醛酸酶的活性表現(xiàn)不同，其中在果皮的病健交界處最高，病斑處其次，健康處

5、最低。
　　 3、較低濃度的鄰苯二酚(0.2～0.5 mg/L)、間苯三酚(0.2～2 mg/L)和香草醛(0.2～2 mg/L)對(duì)龍眼擬莖點(diǎn)霉病菌產(chǎn)細(xì)胞壁降解酶都有一定的誘導(dǎo)作用。1mg/L濃度的鄰苯二酚、2mg/L濃度的間苯三酚和5 mg/L濃度的香草醛都能降低龍眼擬莖點(diǎn)霉病菌產(chǎn)纖維素酶、β-葡萄糖苷酶、多聚半乳糖醛酸酶和果膠甲基半乳糖醛酸酶等細(xì)胞壁降解酶的產(chǎn)量，而且隨著酚類(lèi)物質(zhì)的濃度的升高，其產(chǎn)量逐漸下降。當(dāng)三種酚類(lèi)物質(zhì)濃