茶樹上冰核活性細(xì)菌的分離、鑒定及防治.pdf

1、冰核活性細(xì)菌（ice nucleation active bacteria，簡(jiǎn)稱INA細(xì)菌）是自然界廣泛存在的一類微生物，在沒有冰核活性細(xì)菌存在的條件下，植物可以耐受6~7℃的低溫而不發(fā)生凍害，而當(dāng)冰核活性細(xì)菌存在于植物上時(shí)，可在2~3℃下被誘發(fā)植物細(xì)胞水結(jié)冰而發(fā)生霜凍，。這證明了冰核細(xì)菌是誘發(fā)和加重植物霜凍的重要因素。
　　 茶樹原產(chǎn)于我國(guó)西南較為溫暖濕潤(rùn)的地帶，抵御低溫的能力不強(qiáng)。在INA細(xì)菌存在的情況下，其對(duì)低溫的抵御能力

2、更加弱。從微生物的角度研究茶樹抗寒性為茶樹抗凍提供了一種重要的途徑。本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)一株從茶樹上分離的冰核活性細(xì)菌進(jìn)行鑒定、藥劑防除以及拮抗菌防治，從茶樹微生物的角度為茶樹抗凍提供理論依據(jù)。
　　 本實(shí)驗(yàn)于2009年11月氣溫降低時(shí)從大楊店安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)實(shí)驗(yàn)基地茶園取樣，取樣范圍覆蓋整個(gè)茶園，不以茶樹種類為取樣標(biāo)準(zhǔn)。實(shí)驗(yàn)從樣品中分離到一株INA細(xì)菌，該菌株在5℃下在2min內(nèi)凍滴率達(dá)到85％，一個(gè)冰核產(chǎn)生需要的細(xì)胞數(shù)約為5.4×10

3、3個(gè)，該菌株具有較強(qiáng)的冰核活性。經(jīng)總DNA提取，PCR擴(kuò)增16SrDNA序列對(duì)比分析，該菌株與蔫短小桿菌（Curtobacteriumflaccumfaciens）具有極高的同源性，達(dá)到99％。
　　 根據(jù)GenBank上inaQ基因序列（登陸號(hào)：EU360731）保守序列設(shè)計(jì)引物，PCR擴(kuò)增出冰核基因的片段，經(jīng)GenBankBLAST比對(duì)證明與來自丁香假單胞菌丁香亞種（P．Syringae subsp.syringae)的in

4、p基因具有較高同源性。在5℃條件下，抑菌圈實(shí)驗(yàn)結(jié)果為：次氯酸鈣＞亞甲藍(lán)＞Tween 80＞藏紅；破壞INA細(xì)菌冰核活性物質(zhì)效果為次氯酸鈣最佳，其他幾種試劑效果不明顯；藥劑觸殺INA細(xì)菌結(jié)果為：次氯酸鈣＞藏紅＞亞甲藍(lán)＞Tween80。結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道的含氯化合物抗INA細(xì)菌具有的效果一致。本實(shí)驗(yàn)在同一生態(tài)條件下的土壤中分離出一株拮抗菌，經(jīng)PCR擴(kuò)增16SrDNA反應(yīng)與序列分析鑒定該菌株為黃孢原毛平革菌(Phanerochaetechryso