建鯉BMP15、BMP2B基因克隆及其表達分析.pdf

1、建鯉，作為我國最主要的鯉魚養(yǎng)殖品種之一，因其肉質(zhì)肉味好，飼料轉(zhuǎn)化率高，性溫順，易馴養(yǎng)、易起捕，適應(yīng)性和抗病力強，能自繁自育，遺傳性狀穩(wěn)定等優(yōu)點，備受消費者、養(yǎng)殖戶的青睞。但為具有肌間刺對其深加工造成了影響，從而影響了其經(jīng)濟價值。BMP基因與骨質(zhì)形成發(fā)生有關(guān)，在修復(fù)骨質(zhì)缺損和促進骨折愈合等發(fā)揮重要作用，但對魚類肌間刺的形成、發(fā)生機制、分布等是否有作用還不清楚。因此，本文以建鯉為研究對象，利用RT-PCR和實時熒光定量PCR等技術(shù)，探討B(tài)M

2、P家族中的B MP15和BMP2B基因在建鯉腦、心臟、脾臟、肝臟、卵巢、鰓、腸和肌肉8個組織的mRNA水平的表達，尋求BMP15、BMP2B基因與魚類肌間刺的關(guān)系。
　　 主要研究結(jié)果如下:
　　 1、克隆了BMP15基因的全長cDNA序列，BMP2B基因的部分片段序列，分別為1727bp和948bp，預(yù)測氨基酸序列，分別編碼359和266個氨基酸。氨基酸序列與Genebank中其它物種的該基因的氨基酸同源性均較高。

3、r>　　 2、對獲得的BMP15基因編碼的氨基酸序列分析發(fā)現(xiàn):這段氨基酸序列含有TGF-β結(jié)構(gòu)域;該蛋白疏水性最大值為2.711;蛋白質(zhì)跨膜結(jié)構(gòu)分析顯示，含有一個跨膜結(jié)構(gòu)域;蛋白信號肽預(yù)測，存在一個信號肽切割位點;對二級結(jié)構(gòu)進行預(yù)測，結(jié)果二級結(jié)構(gòu)組成中，無規(guī)則卷曲(coil)占比例最大，達65.74％，α-螺旋(Alpha-Helix)為21.70％，β-折疊(Beta-Strand)最少為13.09％;
　　 BMP15蛋白

4、質(zhì)最大可能位于線粒體;有14個Ser，6個Thr，3個Tyr，可能成為蛋白激酶磷酸化的位點;對糖基化位點進行分析，結(jié)果存在一個N-糖基化位點，而無O-糖基化位點。
　　 對獲得的BMP2B基因編碼的氨基酸序列分析發(fā)現(xiàn):這段氨基酸序列含有兩個低組成復(fù)雜性結(jié)構(gòu)域和一個TGF-β結(jié)構(gòu)域;該蛋白疏水性最大值為1.689;蛋白質(zhì)跨膜結(jié)構(gòu)分析顯示，不存在跨膜結(jié)構(gòu)域;蛋白信號肽預(yù)測，存在一個信號肽切割位點;對二級結(jié)構(gòu)進行預(yù)測，結(jié)果二級結(jié)構(gòu)組成

5、中，無規(guī)則卷曲(coil)占比例最大，達60.90％，β-折疊(Beta-Strand)為30.45％，α-螺旋(Alpha-Helix)最少為8.65％; BMP2B蛋白質(zhì)最大可能位于細胞質(zhì);有7個Ser，0個Thr，3個Tyr，可能成為蛋白激酶磷酸化的位點;對糖基化位點進行分析，結(jié)果存在一個N-糖基化位點，而無O-糖基化位點。
　　 3、系統(tǒng)進化樹分析顯示:建鯉BMP15首先跟異育銀鯽BMP15聚在一起，然后跟斑馬魚、歐洲海

6、鱸BMP15聚在一起，而哺乳動物BMP15也明顯的聚在一起，然后共同聚在一起，可以看出建鯉BMP15首先跟幾個鯉科魚類BMP15聚在一起，說明親緣關(guān)系是較近的。
　　 建鯉BMP2B首先跟同屬于鯉科的斑馬魚BMP2B聚在一起，也說明跟斑馬魚的親緣關(guān)系是最近的。各個物種的魚類BMP2B聚在一起，而哺乳動物BMP2B也明顯的聚在一起，明顯的分為兩大枝。
　　 4、實時熒光定量PCR結(jié)果顯示:建鯉BMP15基因在8個組織中都有

7、表達，但表達水平不一樣。在卵巢中表達量最高，在肝臟、肌肉中其次，呈中度表達，再次是腸、腦和鰓，在心臟和脾臟中的表達量最低;BMP2B基因也在8個組織中均有表達，但表達水平不一樣。在肌肉中的表達量最高，在卵巢、肝臟中其次，呈中度表達，再次是脾臟、鰓和腸，在心臟和腦中的表達量最低。
　　 本文運用RT-PCR和RACE技術(shù)，首次成功克隆了建鯉BMP15和BMP2B基因，并對其作了組織表達譜分析，為進一步研究BMP15和BMP2B基因