小尾寒羊高繁殖力候選基因GnRHR、BMP15和BMPR-IB的研究.pdf

1、本研究以200頭山東省嘉祥種羊場小尾寒羊母羊和30頭北京市順義區(qū)楊鎮(zhèn)種羊場多賽特羊?yàn)檠芯克夭模x用綿羊促性腺激素釋放激素受體(gonadotropinreleasinghormonereceptor，GnRHR)基因、骨形態(tài)發(fā)生蛋白15(bonemorphogeneticprotein15，BMP15)基因、骨形態(tài)發(fā)生蛋白受體IB(bonemorphogeneticproteinIBreceptor，BMPR-IB)基因多態(tài)性為研究內(nèi)容

2、，采用PCR-SSCP技術(shù)分析了GnRHR基因外顯子2和外顯子1部分序列在小尾寒羊、多賽特羊2個(gè)綿羊品種中的多態(tài)性，采用PCR-RFLP技術(shù)檢測BMPR-IB基因和BMP15基因在高繁殖力綿羊品種小尾寒羊中的單核苷酸多態(tài)性，同時(shí)研究這兩個(gè)基因?qū)π∥埠蚋叻敝沉Φ膮f(xié)同效應(yīng)，旨在探索三個(gè)候選基因與小尾寒羊高繁殖力的關(guān)系。得到如下結(jié)論： 1.建立了檢測綿羊GnRHR基因突變的最佳PCR-SSCP方法。在國內(nèi)外對綿羊GnRHR基因多態(tài)性

3、無報(bào)道的前提下，對綿羊的該基因外顯子2和外顯子1部分序列設(shè)計(jì)兩對引物，摸索出最佳的PCR-SSCP條件。 2.對于引物3擴(kuò)增GnRHR基因外顯子1部分片段，2個(gè)綿羊品種均只檢測到AA基因型。對于引物4擴(kuò)增GnRHR基因外顯子2片段，2個(gè)綿羊品種均檢測到AA基因型、AB基因型；小尾寒羊AA、AB基因型頻率分別為0.83和0.17，多賽特羊AA、AB基因型頻率分別為0.60和0.40。引物4多態(tài)片段測序分析表明：位于GnRHR基因c

4、DNA第230處發(fā)生了堿基的改變(G→C)，該突變導(dǎo)致了氨基酸的改變(甘氨酸→半胱氨酸)。對于引物4擴(kuò)增片段，高繁殖力的小尾寒羊的AB基因型頻率明顯低于低繁殖力的多賽特羊AB基因型頻率。 3.高繁殖力的小尾寒羊在BMP15基因編碼序列第718位堿基處發(fā)生了與高繁殖力的Belclare綿羊和Cambridge綿羊相同的FecXG突變(C→T)；對于BMP15基因的FecXG突變，在小尾寒羊中檢測到CC、CD兩種基因型，CC、CD基

5、因型頻率分別為0.40、0.60；突變雜合基因型(CD)小尾寒羊平均產(chǎn)羔數(shù)比野生純合基因型(CC)多0.55只(P＜0.01)。 4.高繁殖力的小尾寒羊在BMPR-IB基因編碼序列第746位堿基處發(fā)生了與高繁殖力的BooroolaMerino綿羊相同的突變(A746G)；小尾寒羊BB、B+、++基因型頻率分別為0.52、0.42、0.06；突變純合基因型(BB)小尾寒羊平均產(chǎn)羔數(shù)比野生純合基因型(++)多1.40只(P＜0.01

6、)，突變雜合基因型(B+)小尾寒羊平均產(chǎn)羔數(shù)比野生純合基因型(++)多1.11只(P＜0.01)。 5.同時(shí)具有BMP15基因FecXG突變(C→T)和BMPR-IB基因746(A→G)突變的小尾寒羊比單獨(dú)具有一個(gè)基因突變的小尾寒羊具有更多的產(chǎn)羔數(shù)，BMPR-IB基因(A746G)突變對小尾寒羊產(chǎn)羔數(shù)的效應(yīng)比BMP15基因FecXG突變的效應(yīng)要大。這也是在任何物種中第一次證明同時(shí)具有BMP15基因FecXG突變和BMPR-IB基