新型肺靶向DTX-LP的藥代動力學(xué)研究及評價.pdf

1、肺癌是一種最常見的惡性腫瘤。近年來，肺癌的發(fā)病率和死亡率在全球都呈現(xiàn)出驚人的增長態(tài)勢。在中國，肺癌已取代肝癌成為首位惡性腫瘤死亡原因，其中非小細胞肺癌（NSCLC）占全部肺癌總發(fā)病率的80％左右。目前，臨床上NSCLC的化療常用方案選擇用鉑類、紫杉醇或多烯紫杉醇（docetaxel，DTX）等抗癌藥物，但由于缺乏靶向性而用藥量大，加之溶媒容易導(dǎo)致較大的毒副作用，限制了這些藥物的使用。因此，較理想的治療策略就是研發(fā)具有肺靶向的制劑。本課題

2、組選擇脂質(zhì)體技術(shù)，以DTX作為模型藥物，采用固體分散技術(shù)和水化技術(shù)相結(jié)合研制的新型多烯紫杉醇脂質(zhì)體（docetaxel liposome，DTX-LP），經(jīng)研究能將DTX主要傳遞至肺部，從而顯著提高了DTX的療效、降低全身毒副作用，基本上解決了脂質(zhì)體肺靶向給藥的關(guān)鍵科學(xué)問題。為此，本課題組以DTX注射液（docetaxel injection，DTX-IN）為參照，擬研究DTX-LP的藥代動力學(xué)行為，主要探討具有肺靶向性DTX-LP的代

3、謝情況。
　　目的：
　　本文以DTX-IN作為參照，在肺靶向下，考察新型DTX-LP在兔藥代動力學(xué)參數(shù)、組織分布、代謝及排泄等方面的異同。探討肺靶向?qū)TX藥代動力學(xué)的影響，闡明新型DTX-LP的藥代動力學(xué)規(guī)律，并進行初步的安全性和療效方面的評價。
　　方法：
　　1.建立兔血漿、尿液和糞便樣品中DTX含量測定的UPLC-MS/MS分析方法，并進行方法學(xué)驗證。
　　2.建立兔血漿和組織樣品中DTX含量測定

4、的RP-HPLC分析方法，并進行方法學(xué)驗證。
　　3.采用UPLC-MS/MS方法測定給藥后一定時間點的DTX兔血藥濃度，運用DASver2.0軟件進行分析和擬合，獲取相關(guān)藥代動力學(xué)參數(shù)。
　　4.采用HPLC方法測定給藥后不同時間點兔體內(nèi)主要組織器官的DTX濃度，考察組織分布，并評價DTX-LP的肺靶向性。
　　5.將DTX-LP與兔肺勻漿、兔肝勻漿和兔肝微粒體在體外共孵育，考察其體外代謝情況。將DTX-LP注入兔體

5、內(nèi)，考察其體內(nèi)代謝情況。
　　6.采用UPLC-MS/MS方法測定兔給藥后不同時間間隔尿液和糞便中DTX含量，考察排泄量和排泄率。
　　結(jié)果：
　　1.建立了兔血漿、尿液和糞便樣品中DTX含量的UPLC-MS/MS測定方法。該方法專屬性強，靈敏度高；相對回收率均在88.3%～109.4%范圍內(nèi)，提取回收率均≥81.3%；日內(nèi)、日間精密度RSD均≤11.3%，能夠滿足生物樣品的分析要求。
　　2.建立了兔血漿和組織

6、樣品中DTX含量的RP-HPLC測定方法。該方法專屬性強，雜質(zhì)峰少，且不影響DTX的測定；相對回收率均在86.2%～118.0%范圍內(nèi)，提取回收率均≥78.8%；日內(nèi)、日間精密度RSD均≤10.9%，能夠滿足生物樣品的分析要求。
　　3.將DTX-LP和DTX-IN分別靜脈注入兔體內(nèi)后，兩種制劑的藥代動力學(xué)行為均符合三室模型，相應(yīng)的AUC(0-t)、分布半衰期t1/2α、消除半衰期t1/2β分別為1.009mg/L·h、0.024

7、h、1.53h和1.963mg/L·h、0.057h、0.465h。其中，DTX-LP的t1/2α顯著縮短，約為DTX-IN的0.42倍，這表明DTX-LP能快速從體循環(huán)中分布到靶器官；而t1/2β顯著延長，約為DTX-IN的3.3倍，則有利于發(fā)揮DTX在體內(nèi)的抗癌作用。同時，DTX-LP的血漿清除率CL為0.636L/h·kg，是DTX-IN的1.64倍，這也表明DTX-LP更容易從血液循環(huán)中消除，而進入到靶器官肺中。
　　4.

8、確證了DTX-LP具有高度的肺靶向性。在注射0.5h，DTX-IN在兔體內(nèi)的DTX濃度從高到低的順序依次為腎、脾、肝、心、肺、胃和腦，其中肺部藥物濃度僅為3.124μg/g。此時，DTX-LP的肺部DTX濃度則高達58.657μg/g（二者相差約19倍），同時，明顯高于其他組織，這使得肺部的DTX濃度顯著增加，而明顯降低了血液、心、腎、胃的DTX濃度，有利于降低DTX在這些部位的毒副作用。DTX-LP組肺組織的靶向指數(shù)TI值為11.77

9、；總靶向效率TE值為61.26%；重量-總靶向效率TQe值為52.83%，與DTX-IN相比，DTX-LP提高了DTX在肺組織的TQe值達到8.5倍之多，這表明DTX-LP具有高度的肺靶向性。
　　5.針對本課題研究需要，提出了兔肺勻漿的DTX藥物代謝研究理念。經(jīng)試驗發(fā)現(xiàn)，DTX-LP和DTX-IN兩種制劑在兔肺勻漿中基本不代謝；在肝勻漿中的DTX含量分別下降了29.1%和38.0%，在肝微粒體中的DTX含量分別下降了23.7%和

10、23.9%；在體外兔肝勻漿孵育時，找到兩種代謝產(chǎn)物，其中一種結(jié)構(gòu)與已知代謝產(chǎn)物M-2相符，另一種Mun-1（分子量821）是一種新的代謝產(chǎn)物；在DTX-LP與DTX-IN兩種制劑的兔體內(nèi)代謝中發(fā)現(xiàn)代謝產(chǎn)物9種，其中已知代謝產(chǎn)物4種，即為M-1、M-2、M-3和M-4，新的代謝產(chǎn)物5種，即為Mun-1、Mun-2、Mun-3、Mun-4和Mun-5。DTX-LP和DTX-IN兩種制劑在兔體內(nèi)的代謝基本一致。
　　6.給藥后0-48h

11、內(nèi)DTX-LP組從糞便和尿液中排出的DTX的排泄量分別為183.9μg和7.21μg，累積排泄率分別為9.2%和0.36%；而DTX-IN糞便和尿液的排泄量分別為359.0μg和13.0μg，累積排泄率分別為17.9%和0.65%。無論糞便還是尿液的累積排泄量和排泄率，DTX-LP組均顯著低于DTX-IN組。
　　結(jié)論：
　　本課題組研制的新型DTX-LP，與DTX-IN相比，其藥代動力學(xué)參數(shù)和組織分布以及在尿和糞中的排泄都

12、有顯著的差異。新型DTX-LP改變了DTX在體內(nèi)的分布，未改變DTX的代謝，DTX-LP與DTX-IN兩種制劑體內(nèi)外代謝基本一致。給藥后，在DTX-LP與DTX-IN兩種制劑的兔體內(nèi)代謝中發(fā)現(xiàn)代謝產(chǎn)物9種，其中已知代謝產(chǎn)物4種，即為M-1、M-2、M-3和M-4，新的代謝產(chǎn)物5種，即為Mun-1、Mun-2、Mun-3、Mun-4和Mun-5。DTX-LP在肺部不代謝。
　　綜上所述，DTX-LP極大提高了DTX在肺部的濃度，而相