環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)(LAMP)與熒光定量PCR檢測(cè)布魯菌方法的建立及對(duì)比試驗(yàn).pdf_第1頁(yè)
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1、為快速、準(zhǔn)確、便捷的檢測(cè)和鑒定布魯菌，本研究依據(jù)熒光定量PCR技術(shù)和環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（LAMP）的原理分別設(shè)計(jì)引物，建立了兩種布魯菌的檢測(cè)方法并對(duì)其進(jìn)行了評(píng)價(jià)。
　　熒光定量PCR方法依據(jù)布魯菌保守基因BCSP31設(shè)計(jì)探針和引物，LAMP方法創(chuàng)新性的運(yùn)用布魯菌多拷貝的插入序列IS711設(shè)計(jì)引物。試驗(yàn)用構(gòu)建的質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)體系進(jìn)行優(yōu)化，確定兩種方法的檢測(cè)下限即靈敏度；將與布魯菌有血清學(xué)交叉反應(yīng)和種源相近的菌株DNA作為對(duì)照評(píng)價(jià)了兩種

2、方法的特異性。為保證標(biāo)本的陽(yáng)性檢出率，本研究用熒光定量PCR技術(shù)分別對(duì)布魯菌病患者的全血和血清中布魯菌DNA進(jìn)行了檢測(cè)，這也是國(guó)內(nèi)首次將血清標(biāo)本用于布魯菌的分子生物學(xué)方法檢測(cè)。試驗(yàn)結(jié)果顯示，血清標(biāo)本比全血更適合作為布魯菌的分子生物學(xué)檢測(cè)用標(biāo)本。通過比較，熒光定量PCR和LAMP技術(shù)均表現(xiàn)出較高的特異性，靈敏度都在102copy/uL的數(shù)量級(jí)水平上。在對(duì)50株布魯菌地方菌株的鑒定中，熒光定量PCR、常規(guī)PCR以及LAMP方法與傳統(tǒng)方法的鑒

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