人源福氏志賀菌對雛雞的致病性及雞腸組織β1基因表達特性研究.pdf

1、志賀菌為革蘭氏陰性病原菌，已被證明是引起人細(xì)菌性痢疾的病原。志賀氏菌可分為福氏志賀菌，鮑氏志賀菌，宋內(nèi)志賀菌和痢疾志賀菌四個群。由福氏志賀菌引起的細(xì)菌性痢疾主要流行在大多數(shù)發(fā)展中國家，而且引起的死亡率超過任何其他志賀菌。人源福氏志賀菌侵襲人的結(jié)腸黏膜后在腸上皮細(xì)胞內(nèi)寄居，同時引起強烈的炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致結(jié)腸黏膜破壞，并最終引發(fā)細(xì)菌性痢疾。2004年，許蘭菊、王川慶等首次發(fā)現(xiàn)志賀菌感染雞的病例，這一發(fā)現(xiàn)對公共衛(wèi)生意義重大。志賀菌感染雞的侵襲機

2、制的研究國內(nèi)外還沒有，而且禽類和哺乳動物在組織結(jié)構(gòu)、體內(nèi)環(huán)境等有很大差異。為此，本文針對人源福氏志賀菌對SPF雞的感染力、侵襲動態(tài)過程以及相關(guān)受體進行初步研究，旨在闡明人源志賀菌對雞感染的機制，為進一步揭示志賀菌的致病機理和理解宿主譜擴大的機制有重要意義。
　　 為確定人源福氏志賀菌在實驗室環(huán)境下對雛雞的致病力。選取一株分離自人的福氏志賀菌作為感染菌，在實驗室環(huán)境下對3日齡無特殊病原(SPF)雞以嗉囊注射和腹腔注射兩種方式分別感

3、染，觀察臨床癥狀及剖檢病變，并在攻毒一周后采集主要組織樣品進行病理組織切片觀察。結(jié)果顯示腸道明顯充血、腫脹，光鏡下發(fā)病動物腸黏膜有明顯的病理變化，表現(xiàn)為水腫、充血；感染途徑不同，病變程度有所差異，腹腔注射組較嗉囊注射組嚴(yán)重。心臟、肝臟等組織的結(jié)構(gòu)大致完整，病理改變不明顯。由此得出結(jié)論：人源福氏志賀菌對SPF雛雞有致病性，主要感染雛雞的腸組織，對其他主要組織也有一定程度的影響。
　　 為進一步研究人源福氏志賀菌對雛雞的侵襲特性，對

4、3日齡SPF雞進行腸袢攻毒試驗，分別于攻毒后2h、6h、12h取出試驗雞整段腸組織，進行免疫組化和電鏡觀察。免疫組化觀察可知：空腸利回腸段上皮細(xì)胞內(nèi)觀察到志賀菌體的存在，十二指腸、盲腸和直腸則未檢測到；電鏡結(jié)果顯示，在空腸回腸段上皮細(xì)胞內(nèi)觀察到菌體，與免疫組化結(jié)果一致。以上試驗可知，人源福氏志賀菌能侵襲雛雞腸上皮細(xì)胞，侵襲部位主要集中在空腸和回腸。
　　 為鑒定β1整合素在雛雞腸組織中時空表達特點，設(shè)計一對引物，建立反轉(zhuǎn)錄PCR

5、方法對β1mRNA進行鑒定，在鑒定完成的β1基因序列上選取保守區(qū)域設(shè)計一對定量PCR引物，同時選取GAPDH基因為內(nèi)參，將β1和內(nèi)參擴增產(chǎn)物與PMD18-T載體連接，構(gòu)建重組質(zhì)粒作為定量檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，建立檢測雞β1mRNA表達水平的SYBRGreenI實時熒光定量(Q-PCR)方法，并采用該方法對1-20日齡商品雞腸組織不同部位中β1mRNA表達水平進行檢測。結(jié)果顯示不同日齡不同腸段β1mRNA相對表達量具有差異，十二指腸和盲腸組織中β