雞大腸埃希氏菌iss基因與其致病力相關(guān)性的研究.pdf

1、大腸埃希氏菌（又名大腸桿菌）是自然環(huán)境中的常在菌，亦是溫血動物消化道下段的常住菌，屬革蘭氏陰性中等大小的桿菌。研究表明，某些血清型的大腸桿菌為致病菌，某些血清型的大腸桿菌不致病，是動物腸道的益生菌，而另一些大腸桿菌為條件致病菌，在一般情況下不致病，但在飼養(yǎng)環(huán)境衛(wèi)生條件差、動物應(yīng)激、免疫力低下等情況下會造成發(fā)病。
　　有研究表明，大腸桿菌iss基因(increased serum resistance gene)的存在與否是判定大腸

2、桿菌致病性的重要手段之一。但亦有實驗表明，大腸桿菌iss基因幾乎存在于所有大腸桿菌中，因此，深入研究大腸桿菌iss基因與其致病力的關(guān)系對科學(xué)防治本病具有重要的指導(dǎo)意義。
　　本研究對72株雞源大腸桿菌iss基因分別通過外套PCR、內(nèi)套PCR和實時熒光定量PCR進行了檢測，檢測結(jié)果表明，利用外套PCR和內(nèi)套PCR檢測到69株菌具有iss基因，3株未檢測出iss基因，但實時熒光定量PCR檢測該3株菌均有iss基因的存在，實驗結(jié)果表明，

3、iss基因在大腸桿菌中普遍存在，但其轉(zhuǎn)錄水平的高低因不同的菌株有所差異。
　　將69株大腸桿菌iss基因序列進行測序，與其他19株大腸桿菌序列一起進行比對，共有16種不同的核苷酸序列，10種氨基酸序列，分別命名為type1-16和form1-10。經(jīng)過比對發(fā)現(xiàn)，不同序列之間的差異很小，突變的位置較為固定，但多數(shù)氨基酸序列并未發(fā)生改變，表明該基因保守性很高。進化樹分析結(jié)果顯示，16種核苷酸序列的進化樹分為2個主干，其中type15序

4、列菌株和type16序列菌株位于同一分支，type1-14序列菌株位于同一大分支。氨基酸序列分析結(jié)果顯示，進化樹主要分為2個大分支，其中form3、5序列菌株位于同一分支，其他序列菌株位于另一分支。
　　隨機選取30株大腸桿菌分別接種雛雞進行了致病性試驗，并進行了實時熒光定量PCR檢測30株大腸桿菌iss基因的轉(zhuǎn)錄水平，檢測結(jié)果顯示，菌株相對拷貝數(shù)的對數(shù)與其毒力成正相關(guān)。
　　分析發(fā)現(xiàn)，相對拷貝數(shù)的對數(shù)、毒力及血清抗性三者兩

5、兩之間存在正相關(guān)關(guān)系，相對拷貝數(shù)的對數(shù)和雛雞致死試驗結(jié)果的相關(guān)性系數(shù)為0.769，p=0.000＜0.01，極顯著正相關(guān);相對拷貝數(shù)的對數(shù)與流式細胞術(shù)結(jié)果的相關(guān)性系數(shù)為0.662，p=0.000＜0.01，極顯著正相關(guān);流式細胞術(shù)結(jié)果與雛雞致死結(jié)果的相關(guān)性系數(shù)為0.456，p=0.011＜0.05，顯著正相關(guān)。這說明iss基因的轉(zhuǎn)錄水平越高，大腸桿菌對于血清的抵抗能力越強，致病力越強。
　　本研究結(jié)果顯示，iss基因在大腸桿菌中是