福氏2a志賀氏菌2457T mxiE基因功能的研究.pdf

1、志賀氏菌屬(Shigellaspp.)細(xì)菌俗稱痢疾桿菌，是一類兼性厭氧、不產(chǎn)生芽孢的革蘭氏陰性桿菌，可以侵入結(jié)腸上皮，并在結(jié)腸中繁殖，導(dǎo)致強(qiáng)烈的炎癥反應(yīng)和上皮損傷。據(jù)WHO統(tǒng)計(jì)，全球每年約有1.647億人感染痢疾，110萬人死亡，大多數(shù)為發(fā)展中國(guó)家的兒童。福氏志賀氏菌是發(fā)展中國(guó)家主要的感染菌株，福氏2a志4賀氏菌是主要的血清型。我國(guó)每年大約有2000萬人次感染痢疾，感染或大流行的痢疾桿菌中50-70％是由福氏2a志賀氏菌引起的，因此，福

2、氏2a志賀氏菌的基礎(chǔ)研究對(duì)于我國(guó)衛(wèi)生防疫工作尤為重要。 志賀氏菌毒力基因的表達(dá)和調(diào)控對(duì)其致病性至關(guān)重要。迄今為止，痢疾桿菌毒力基因和致病性的關(guān)系還不明晰。因此，探求已知毒力因子作用的分子機(jī)制，尋找新的毒力基因成為志賀氏菌研究的熱點(diǎn)。 Mxi-spa基因簇位于福氏志賀氏菌的毒力質(zhì)粒，編碼細(xì)菌Ⅲ型分泌系統(tǒng)的組成成分。mxiE即定位于此基因簇，編碼一個(gè)與AraC/XylS轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)子家族同源的蛋白，其在志賀氏菌侵襲過程中所起的作

3、用甚不清楚。本研究采用改進(jìn)的λ-Red重組系統(tǒng)成功構(gòu)建了mxiE基因缺失突變株，對(duì)突變株進(jìn)行了生理生化特征研究。結(jié)果表明：mxiE的缺失對(duì)菌體的生長(zhǎng)影響不大；相比于野生株，突變株利用甘露糖的能力增強(qiáng)，而利用葡萄糖的能力降低。 突變株和野生株的毒力蛋白差異表達(dá)是評(píng)價(jià)基因功能的一個(gè)重要依據(jù)。本研究采用WesternBlotting方法考察了突變株和野生株毒力蛋白IpaB(侵襲所需的效應(yīng)因子)的分泌能力；采用雙向凝膠電泳建立了不同生長(zhǎng)

4、時(shí)期、誘導(dǎo)條件下，野生株和mxiE突變株的雙向電泳圖譜，并對(duì)差異點(diǎn)進(jìn)行了膠內(nèi)酶切和質(zhì)譜鑒定。結(jié)果表明：mxiE基因缺失突變株依然分泌毒力蛋白IpaB；在不同生長(zhǎng)時(shí)期和誘導(dǎo)條件下，野生株和mxiE突變株的雙向電泳呈現(xiàn)差異，毒力相關(guān)蛋白PhoN2、OmpA和HtrA在mxiE基因缺失突變株中表達(dá)下調(diào)。 評(píng)價(jià)mxiE基因的功能，除了在蛋白水平上研究毒力蛋白的表達(dá)差異，還需通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ瓦M(jìn)行功能驗(yàn)證。本研究采用豚鼠角膜侵襲實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞侵