馬鈴薯StTm-2基因的克隆和表達(dá)分析.pdf

1、馬鈴薯是世界第四大糧食作物，在我國糧食、蔬菜、飼料和加工原料生產(chǎn)上占有重要地位。病毒病一直是馬鈴薯生產(chǎn)發(fā)展的一大障礙，其不僅影響了馬鈴薯品種退化、產(chǎn)量下降更重要的是影響了馬鈴薯的品質(zhì)。傳統(tǒng)的育種方式已經(jīng)不能滿足馬鈴薯生產(chǎn)的需要，所以利用基因工程技術(shù)結(jié)合傳統(tǒng)的育種技術(shù)進(jìn)行馬鈴薯新品種的培育是當(dāng)前馬鈴薯生產(chǎn)最需解決的問題。本研究目的在于利用番茄與馬鈴薯高同源性特點(diǎn)培育多抗，耐儲藏馬鈴薯品種做前期的理論和技術(shù)基礎(chǔ)研究，所取得的主要結(jié)果如下：

2、 1、對長期種植篩選出的番茄品系KBV進(jìn)行抗性鑒定。結(jié)果證明該番茄品系KBV對TMV、TOMV高抗。根據(jù)已報道的番茄抗性基因Tm-2<'2>設(shè)計特異性引物通過RT-PCR擴(kuò)增得到2238bp的片段PFlRl，經(jīng)比對證實(shí)KBV為含Tm-2<'2>基因的番茄品系。 2、根據(jù)Tm-2<'2>基因與Tigr Blast中報道的部分序列相比對，通過簡并引物的設(shè)計，利用RT-PCR和RACE技術(shù)擴(kuò)增出Tm-2<'2>基因在馬鈴薯同源基

3、因StTm-2的全長cDNA序列，在Gene Bank中的登錄號為EF137705。經(jīng)序列分析表明，該基因cDNA序列全長2547bp，包含一個完整的開放閱讀框。該cDNA編碼849個氨基酸，推測蛋白質(zhì)分子量為96891.5Da，等電點(diǎn)為7.65，與番茄Tm-2<'2>及擬南芥RPS2的氨基酸序列同源性分別為76％與31％。擁有兩個跨膜結(jié)構(gòu)。以及抗性蛋白所特有的NBS結(jié)構(gòu)區(qū)域，固我們推測該基因?yàn)镹BS類抗性或抗性相關(guān)基因。利用North

4、em技術(shù)對StTm-2在馬鈴薯組織中的表達(dá)情況做了研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該基因在地上部分組織中的表達(dá)明顯強(qiáng)于底下部分與Tm-2<'2>基因在番茄中的表達(dá)相似。 3、對已報道的試管薯誘導(dǎo)技術(shù)進(jìn)行簡單的改進(jìn)，即轉(zhuǎn)接入誘導(dǎo)培養(yǎng)基的馬鈴薯組織不經(jīng)過光照培養(yǎng)直接進(jìn)行黑暗處理，能在較短的時間里誘導(dǎo)出試管薯。并研究在這樣的誘導(dǎo)體系下不同類型培養(yǎng)基、不同糖份以及激素對誘導(dǎo)的影響。最后利用實(shí)驗(yàn)室已構(gòu)建好的載體對其轉(zhuǎn)化體系進(jìn)行摸索，因時間關(guān)系，本人僅得到可