桑樹枝條桑皮苷A的制備及其抑制酪氨酸酶的機理.pdf

1、本實驗以桑樹枝條韌皮部（簡稱桑枝皮）為材料，高效制備桑枝皮醇提物，利用大孔樹脂的吸附作用，通過水和醇水溶液的梯度洗脫，在這種桑枝皮醇提物中獲得30％醇水溶液洗脫組分后，再利用半制備HPLC-DAD技術從該組分中提取出醇水相中的主要活性單體成分，經(jīng)LC-MS、1H和13C NMR譜鑒定為桑皮苷A，即氧化白藜蘆醇3-4’-β-D-二葡萄糖苷(簡稱氧化白藜蘆醇二糖苷或Mul A)。
　　 桑皮苷A在桑樹中不同部位的水平差異顯著，沙二根

2、皮中的水平是其枝皮的32倍，達到23.01μg/mg;湖桑32號根皮水平高達25.73μg/mg，但僅高其枝皮水平2.4倍;而延邊秋雨根皮桑皮苷A水平恰與其枝皮（19.03μg/mg）相當，幾乎沒有多大差別;桑葉中都基本檢測不到桑皮苷A。所以，桑根皮中桑皮苷含量普遍較高，而桑枝皮中含量差異顯著，桑葉中幾乎沒有。
　　 100個栽培桑品種的桑枝皮桑皮苷A含量的HPLC分析顯示，品種間差異十分顯著，大種桑、黑油桑、睦州青和7311含

3、量極高，其含量分別為25.47μg/mg、22.01μg/mg、22.28μg/mg和20.11μg/mg。而黃枝桑、四方唉、沙2和塘10四個桑種含量很低;含量最高與最低竟相差五、六十倍。
　　 桑皮苷A是一種氧化白藜蘆醇的二葡萄糖苷，所以本試驗以氧化白藜蘆醇為對照，對多巴色素生成過程的影響作了較為系統(tǒng)的研究。結果表明桑皮苷A與氧化白藜蘆醇一樣，是一個真正的酪氨酸酶抑制劑，在體外通過抑制酪氨酸酶單酚酶和二酚酶的活性而抑制多巴色素

4、的生成。
　　 本實驗分別以L-酪氨酸和L-DOPA為底物，研究了桑皮苷A對蘑菇酪氨酸酶單酚酶和二酚酶活性的影響，結果表明，桑皮苷A具有很強的蘑菇酪氨酸酶單酚酶抑制活性，其IC50值為0.13μmol/L，與氧化白藜蘆醇相當(0.12μmol/L)，但桑皮苷A對蘑菇酪氨酸酶二酚酶活性則比氧化白藜蘆醇弱得多，其IC50僅為0.39μmol/L。
　　 對蘑菇酪氨酸酶抑制機理分析測定的結果表明，桑皮苷A和氧化白藜蘆醇對單酚酶

5、和二酚酶都是一種可逆抑制。對蘑菇酪氨酸酶抑制類型判定結果表明，桑皮苷A和氧化白藜蘆醇一樣，對蘑菇酪氨酸酶這種單酚酶的抑制類型都屬于混合I型，其KI分別為29.22μmol/L和92.60μmol/L，KIS分別為37.70μmol/L和66.20μmol/L;不過，兩者對二酚酶抑制類型則不同，桑皮苷A為競爭抑制，KI=1.56μmol/L，而氧化白藜蘆醇則為非競爭抑制，KIS＝KI=2.95μmol/L。
　　 本實驗的研究結果