柿葉黃酮抑制酪氨酸酶活性的研究.pdf

1、柿葉是柿的新鮮或干燥葉片，其味苦，具有止血、抗癌等多種醫(yī)療保健功能，柿葉的主要有效成分是黃酮類化合物。酪氨酸酶抑制劑（Tyrosinase Inhibitor，TI）通過(guò)抑制酪氨酸酶活性從而抑制黑色素的生成。因此，TI可以降低食品褐變程度從而可以作為保鮮劑。本文的目的是對(duì)柿葉中的黃酮類化合物的制備工藝進(jìn)行優(yōu)化，并研究其對(duì)酪氨酸酶的抑制效果及其在果蔬保鮮中的應(yīng)用。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴采用纖維素酶法提取柿葉黃酮(PLF)，在單

2、因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上選取試驗(yàn)因素與水平，根據(jù)中心組合(Box-Benhnken)試驗(yàn)設(shè)計(jì)原理，采用三因素三水平的響應(yīng)面分析法，依據(jù)回歸分析各影響因素。以PLF得率為響應(yīng)值作響應(yīng)面和等高線，得出柿葉黃酮提取的最佳工藝條件為：加酶量9mg，酶解溫度52℃、pH4.8、酶解時(shí)間130min，在上述最優(yōu)條件下，柿葉黃酮得率達(dá)2.47％。⑵實(shí)驗(yàn)表明AB-8樹(shù)脂的對(duì)柿葉黃酮分離效果最好，實(shí)驗(yàn)所得的最佳工藝為：上柱液pH值6，上柱液流速2BV/h，樣液濃度

3、為3mg/mL，70%乙醇為洗脫液，洗脫液流速控制在2BV/h，洗脫液用量為3BV。經(jīng)此條件純化后，PLF提取物中黃酮含量由9%提高到34%。AB-8大孔樹(shù)脂可以較好地分離純化PLF。⑶用L-酪氨酸為底物，用紫外分光光度法測(cè)定 PLF對(duì)酪氨酸酶的抑制作用。結(jié)果表明，PLF對(duì)酪氨酸酶的抑制效果明顯，其IC50值為2.38mg/mL，抑制作用屬于可逆過(guò)程，其抑制類型為混合型，KI為0.33，KIS為0.48。⑷對(duì)PLF進(jìn)行了抗氧化實(shí)驗(yàn)和絡(luò)合

4、Cu2+的實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，PLF對(duì)DPPH?、超氧陰離子自由基(O2-)和羥自由基(OH)均有較好的清除率，對(duì)Cu2+有較強(qiáng)的絡(luò)合能力。說(shuō)明PLF對(duì)酪氨酸酶的抑制與其較強(qiáng)的抗氧化能力及其絡(luò)合金屬離子的能力有關(guān)。⑸以Vc含量、TSS含量和褐變度三個(gè)指標(biāo)綜合考察了PLF對(duì)鮮切蘋(píng)果的保鮮效果。結(jié)果表明：PLF對(duì)鮮切蘋(píng)果片具有一定的保鮮效果，當(dāng)PLF濃度為0.1mg/mL，浸泡時(shí)間為5min時(shí)的保鮮效果最佳；PLF對(duì)鮮切蘋(píng)果片的保鮮作用與其