連翹花抑制酪氨酸酶活性及化學成分研究.pdf

1、連翹（Forsythia suspensa(Thunb) Vahl）為木犀科（Oleaceae）連翹屬植物。其成熟果實為一種傳統(tǒng)中藥，具有清熱解毒、散結(jié)消腫之功效。連翹每年早春三月先葉開花，花期長，花量大，花色長久不褪。目前人們對連翹研究比較充分，但對連翹花的化學成分和藥理活性研究較少。在化學成分方面，主要對連翹花揮發(fā)油成分進行了分析研究，從連翹花中分離鑒定出了蘆丁(Rutin)、連翹酯苷A(ForsythiasideA)、連翹苷(Ph

2、illyrin)、連翹脂素(Phillygenin)、松脂素((+)-Pinoresinol)、(+)-松脂素-β-D-葡萄糖苷((+)-pinoresinol-β-D-glucoside)、連翹醇(Rengyol)、齊墩果酸(Oleanolic Acid)、β-谷甾醇(β-Sitosterol)、棕櫚酸(Palmitic Acid)10個化合物。在藥理活性方面，主要發(fā)現(xiàn)連翹花具有抗氧化和抗菌活性。據(jù)報道，連翹花及果實具有消除黃褐斑、蝴

3、蝶斑等美容功效，但目前尚不清楚其中的化學物質(zhì)基礎和作用機制。由于連翹果實主要用于中藥制藥和臨床處方用藥，而在連翹花落期產(chǎn)生的大量落花被遺棄、沒有被利用。因此，為了充分利用連翹花資源，本文主要以抑制酪氨酸酶活性為指導，對連翹花抑制酪氨酸酶活性不同有效部位進行了篩選，并對連翹花的化學成分進行了初步研究。具體內(nèi)容如下：
　　1.以L-酪氨酸(L-Tyr)為底物，蘑菇酪氨酸酶(TYR)為酶，采用單因素考察法優(yōu)化了酶、底物的量及反應時間，確

4、定了酶活反應體系：130μL PBS+50μL TYR(120 U/mL)+20μL L-Tyr(0.45 mg/mL)，475nm下反應30 min；利用上述體系對連翹不同器官—花、葉、果實（青翹和老翹）的水提物進行了抑酶活性評價。結(jié)果表明，連翹花水提物對蘑菇酪氨酸酶活性的抑制表現(xiàn)出了濃度依賴性，且在所設濃度范圍內(nèi)，果實(青翹和老翹)和連翹葉的最高抑制率均低于連翹花，因此，本課題以連翹花為研究對象，對其進行下一步研究。
　　2.

5、采用中低壓制備分離技術(shù)，對連翹花水提物(LQH-W)進行了初步分離，得到LQH-W-1、LQH-W-2、LQH-W-3、LQH-W-4、LQH-W-5五個組分。以熊果苷為陽性對照，分別測定了連翹花水提物和上述五個組分對蘑菇酪氨酸酶的抑制活性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)LQH-W-2的IC50為1.175 mg/mL、LQH-W-3為1.441 mg/mL、LQH-W-4為0.668 mg/mL、LQH-W-5為1.427 mg/mL，均表現(xiàn)出了較好的抑酶

6、活性。其中組分LQH-W-4的IC50與陽性對照物熊果苷（IC50：0.516 mg/mL）相近，在連翹花中表現(xiàn)出了最好的抑制活性，其作為天然酪氨酸酶抑制劑在美白化妝品方面有很好的應用前景。
　　3.為了比較全面地研究連翹花中抑制蘑菇酪氨酸酶的活性組分和活性成分，對連翹花脂溶性提取物進行了研究。利用羥丙基葡聚糖凝膠色譜(Sephadex LH-20)、MDS中低壓制備和HPLC制備色譜等方法對連翹花乙酸乙酯提取物和95％乙醇提取物

7、的化學成分進行了分離和鑒定。最終分離得到5個化合物，分別為連翹酯苷A(1)、蘆丁(2)、(+)-pinoresinol-β-D-glucoside(3)、(+)-Pinoresinol monomethyl etherβ-D-glucoside(4)和(+)-phillyrin(5)。鑒定了三個木脂素類化合物，其中(+)-Pinoresinol monomethyl etherβ-D-glucoside為首次從連翹花中分離得到。并對(+

8、)-pinoresinol-β-D-glucoside、(+)-phillyrin、蘆丁、連翹酯苷A及分離過程中各組分進行了抑制酪氨酸酶活性測定，發(fā)現(xiàn)四個化合物抑酶活性較弱，未得到連翹花中起抑酶作用的主要單體成分。而aFr2和bFr4兩組分抑酶活性與陽性對照物相當，作為天然酪氨酸酶抑制劑在美白化妝品方面具有很好的應用潛力。
　　4.采用HPLC法對連翹花、葉、果實（青翹和老翹）中(+)-松脂素-β-D-葡萄糖苷、連翹酯苷A、蘆丁和