連翹抑制酪氨酸酶活性有效物質(zhì)基礎(chǔ)研究.pdf

1、目的：以連翹二氯甲烷萃取物為研究對(duì)象，分離、鑒定其有效成分，并評(píng)價(jià)它們對(duì)酪氨酸酶活性的抑制作用。
　　 方法：利用高效液相偶聯(lián)酪氨酸酶活性檢測(cè)法指導(dǎo)建立分離有效成分的色譜條件;采用硅膠柱色譜、半制備高效液相色譜、凝膠色譜快速分離純化有效成分;通過UV、MS、1H-NMR、13C-NMR等波譜技術(shù)鑒定有效成分的結(jié)構(gòu);應(yīng)用蘑菇酪氨酸酶活性抑制實(shí)驗(yàn)、MTT實(shí)驗(yàn)法及B16黑色素瘤細(xì)胞內(nèi)酪氨酸酶活性抑制實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)了該6種化合物的酪氨酸酶活性

2、抑制能力;利用HPLC法測(cè)定連翹中抑制酪氨酸酶有效成分的含量。
　　 結(jié)果：從連翹二氯甲烷部位中分離得到了6個(gè)具有抑制酪氨酸酶活性的成分:分別為三萜類（白樺脂酸、熊果酸）、木脂素類（連翹脂素、連翹苷）、苯乙醇苷類(Forsythoside A、suspensaside A);蘑菇酪氨酸酶活性抑制實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示白樺脂酸、suspensaside A具有明顯的抑制作用，白樺脂酸的IC50為100.30μmol/L，與陽性對(duì)照熊果苷的I

3、C50值（99.05μmol/L）相當(dāng)，suspensaside A的IC50值(41.17μmol/L)為陽性對(duì)照熊果苷的IC50值的1/2; MTT實(shí)驗(yàn)法顯示熊果酸、連翹脂素抑制B16細(xì)胞生長(zhǎng)作用明顯，其中熊果酸的IC50值(0.75μmol/L)遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于陽性對(duì)照熊果苷的IC50值（35.53μmol/L），連翹脂素的IC50值（44.64μmol/L）與熊果苷的相當(dāng);B16細(xì)胞內(nèi)酪氨酸酶活性抑制實(shí)驗(yàn)顯示白樺脂酸(IC506.18μ

4、mol/L)、熊果酸(IC500.05“mol/L)、連翹脂素、Forsythoside A(IC500.55μmol/L)、suspensasideA（IC505.77μmol/L）均表現(xiàn)出明顯的抑制酪氨酸酶的活性，熊果酸的IC50低于陽性對(duì)照熊果苷(IC500.07μmol/L);連翹中ForsythosideA、suspensaside A、連翹苷、連翹脂素、白樺脂酸、熊果酸含量分別為1.57％、0.29％、0.19％、0.06％