黃病毒解旋酶來源的富含精氨酸肽對日本腦炎病毒抑制作用的研究.pdf

1、日本腦炎病毒(JEV)屬于黃病毒科，是引起人類和動物急性病毒性腦炎的病原之一，以蚊為傳播媒介在人和動物中傳播。人感染JEV后引起不可逆的神經(jīng)系統(tǒng)損害，死亡率在20-50％;豬感染JEV后引起妊娠母豬流產(chǎn)，產(chǎn)死胎、木乃伊胎、弱仔，公豬睪丸炎，嚴重危害人類健康以及養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展。JEV基因組編碼3個結構蛋白和7個非結構蛋白，其中非結構蛋白NS3是一個多功能的大分子蛋白，性質保守，具有蛋白酶和NTP酶/解旋酶活性，NS3在病毒多蛋白加工和基因組復

2、制及病毒與宿主細胞的相互作用過程中扮演十分重要的作用，其完整的酶學活性對病毒的增殖是必不可少的，是潛在的抗病毒研究靶點。
　　抗病毒肽是一類對病毒有殺傷作用或抑制作用的小分子多肽，在病毒感染早期就能對病毒產(chǎn)生抑制作用，越來越多的研究證明了多肽對許多病毒有抗病毒作用，包括艾滋病病毒(HIV)、丙型肝炎病毒(HCV)、禽流感病毒（AIV）等，因此抗病毒肽具有廣闊的應用前景。有研究報道來源于HCV、JEV、WNV解旋酶保守的富含精氨酸肽

3、能夠抑制解旋酶的活性。
　　本試驗合成了來源于CSFV、DENV、JEV、HCV、WNV解旋酶富含精氨酸的5個肽，通過實時熒光定量RT-PCR、流式細胞術、噬斑試驗、組織病理學與免疫組化研究、動物試驗等方法研究這些肽對JEV的抑制作用。
　　我們的結果證實了這些富含精氨酸肽能夠有效的穿過細胞膜迅速的定位到細胞質，而且這些肽在細胞中能至少穩(wěn)定48小時，細胞毒性試驗的結果證明這些肽在細胞中沒有明顯的細胞毒性。這些肽在體內和體外對

4、JEV都有不同程度的抑制作用，其有效濃度EC50在微摩爾范圍之內。在100μM濃度時Pjev、Pcsfv和Phcv強烈抑制了病毒RNA水平，減少了JEV囊膜蛋白的表達，在EC5015μM時抑制了JEV在BHK-21細胞內的復制。動物試驗顯示肽能延遲EV攻毒小鼠的死亡時間，減弱臨床癥狀。與其他肽相比，Pjev抑制JEV的效果更好，預處理Pjev降低了小鼠的死亡率，對小鼠有75％的保護率，其他肽盡管不能保護所有的小鼠免受致死劑量的JEV感染