小檗堿對Epstein-barr病毒DNA復(fù)制的抑制作用.pdf

1、背景與目的： EB病毒（Epstein-barr virus，EBV）的感染與鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展有著密切的關(guān)系，EB病毒相關(guān)抗體和EBV-DNA的檢測已作為鼻咽癌早期診斷、療效評價的一個指標(biāo)。小檗堿（Berberine，BBR）或含BBR的中藥復(fù)方在鼻咽癌防治中起重要作用。本文通過分析BBR處理后Raji細胞中EBV-DNA的變化量，探討B(tài)BR對EBV-DNA復(fù)制的抑制作用。 方法： 選取帶EB病毒的Raji細胞

2、作為研究材料，運用四甲基偶氮唑藍（MTT）法分析BBR對Raji細胞生長的影響，選用BBR的細胞無毒性濃度（non-cytotoxic concentration，NCC）處理Raji細胞，同時測定培養(yǎng)基中LDH的含量，進一步確證BBR的NCC；采用巢式熒光定量PCR方法，在Mx3000p型檢測儀上定量檢測EBV-DNA的含量，分析BBR對EBV-DNA復(fù)制的影響。 結(jié)果： 1.MTT結(jié)果顯示，BBR在10～100μol

3、/l對Raji細胞增殖生長有明顯的抑制作用（P<0.05），而在0～10μmol/l對Raji細胞生長增殖無明顯影響（P>0.05），因此0～10μmol/l為BBR對Raji的細胞無毒性濃度（NCC）。 2.LDH結(jié)果表明，BBR在0～10μmol/l時處理Raji細胞，細胞培養(yǎng)基中LDH含量與空白對照組無明顯差異。0～10μmol/l確為BBR細胞無毒性濃度范圍（NCC），下部實驗采用該濃度進行實驗。 3.巢式熒光定

4、量PCR分析EBV-DNA拷貝數(shù)結(jié)果表明，當(dāng)BBR的濃度為40μmol/l、10μmol/l、1.25μmol/l時處理Raji細胞，細胞中EBV-DNA拷貝數(shù)顯著降低（P<0.05）。 結(jié)論： 1.MTT結(jié)果和LDH檢測結(jié)果均提示，0～10μmol/l為BBR的對Raji細胞的細胞無毒性濃度。 2.BBR可以抑制Raji細胞中EVB-DNA的復(fù)制。 3.BBR在0～10μmol/l范圍對Raji細胞生長