ODC和AdoMetDC雙義腺病毒對(duì)肺癌增殖和侵襲抑制作用的研究.pdf

1、多胺是機(jī)體中一種重要的陽(yáng)離子脂肪族有機(jī)胺，在細(xì)胞增殖、分化中起重要的作用，細(xì)胞周期的維持也需要多胺的合成。鳥(niǎo)氨酸脫梭酶(ODC)和S-腺苷甲硫氨酸脫羧酶(AdoMetDC)是多胺生物合成的的關(guān)鍵酶。研究已證實(shí)，肺腫瘤中多胺水平明顯增高，鳥(niǎo)氨酸脫羧酶(ODC)和S-腺苷甲硫氨酸脫羧酶(AdoMetDC)的表達(dá)也明顯高于正常肺組織。我們?cè)诔晒?gòu)建并擴(kuò)增出ODC和AdoMetDC雙反義RNA腺病毒載體的基礎(chǔ)之上。研究鳥(niǎo)氨酸脫羧酶和S-腺苷甲硫

2、氨酸脫羧酶雙反義腺病毒對(duì)肺癌增殖和侵襲抑制作用 目的:探討重組鳥(niǎo)氨酸脫羧酶和S-腺苷甲硫氨酸脫羧酶雙反義腺病毒載體(Ad-ODC-AdoMetDCas)介導(dǎo)的鳥(niǎo)氨酸脫羧酶(ODC)和S-腺苷甲硫氨酸脫羧酶(AdoMetDC)反義RNA對(duì)肺癌細(xì)胞多胺合成、增殖和侵襲的抑制作用。 方法： 1.構(gòu)建并擴(kuò)增出ODC和SAMDC雙反義RNA腺病毒載體； 2.采用活細(xì)胞計(jì)數(shù)法實(shí)驗(yàn)觀察Ad-ODC-AdOMetDCas

3、對(duì)肺癌A-549細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的影響； 3.采用Western印跡和高效液相色譜分別檢測(cè)腺病毒對(duì)肺癌A-549細(xì)胞中ODC和AdoMetDC蛋白表達(dá)以及胞內(nèi)多胺含量； 4.采用活細(xì)胞計(jì)數(shù)和流式細(xì)胞儀分別檢測(cè)腺病毒介導(dǎo)的鳥(niǎo)氨酸脫羧酶反義RNA和Ad-ODC-AdoMetDCas對(duì)A-549細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期分布的影響： 5.應(yīng)用Matrigel侵襲實(shí)驗(yàn)分析腺病毒對(duì)肺癌細(xì)胞侵襲活性的改變。 結(jié)果： 1.

4、成功構(gòu)建并擴(kuò)增出ODC和SAMDC雙反義RNA腺病毒載體2.當(dāng)感染效率為50時(shí)，腺病毒對(duì)A-549細(xì)胞感染率約75％； 3.Ad-ODC-AdoMetDCas可明顯抑制A-549細(xì)胞ODC和AdoMetDC基因表達(dá)；A-549細(xì)胞感染Ad-ODC-AdoMetDCas后，胞內(nèi)多胺含量明顯降低； 4.感染Ad-ODC-AdoMetDCas的A-549細(xì)胞停滯在G1期； 5.Ad-ODC-AdoMetDCas可顯著降