5-35嵌合型腺病毒載體對腦膠質(zhì)瘤的抑制作用.pdf

1、目的：通過構(gòu)建一種新型腺病毒載體，進(jìn)一步證明腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(TRAIL基因)在治療膠質(zhì)瘤的療效，并證明新型載體的優(yōu)勢。
　　 方法：經(jīng)美國華盛頓大學(xué)實(shí)驗(yàn)室授權(quán)獲得Ad5/35△E1-△E3，即其E1和E3缺失的5型腺病毒纖維fiber被35型腺病毒fiber替代的載體。利用基因重組，構(gòu)建出重組腺病毒質(zhì)粒Ad5/35△E1-△E3-TRAIL。氯化銫密度梯度離心純化Ad5/35△E1-△E3-TRAIL，并測定病毒滴

2、度。采用逆轉(zhuǎn)錄酶-多聚酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)、免疫熒光技術(shù)、蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)分別檢測目的基因的表達(dá)。
　　 結(jié)果：純化后Ad5/35△E1-△E3-TRAIL的病毒滴度為1.22×1015 pfu/l。重組質(zhì)粒經(jīng)RT-PCR都擴(kuò)增出104 bp的基因片段。免疫熒光和Western blot檢測到了目的基因的高效表達(dá)。
　　 結(jié)論：新型腺病毒載體質(zhì)粒Ad5/35△E1-△E3-TRAIL能夠高效的