Thd對(duì)SLE和RA免疫抑制作用的研究.pdf

1、目的：探討沙利度胺(Thd)對(duì)系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)患者外周血T淋巴細(xì)胞、SD大鼠滑膜細(xì)胞以及RA患者Th17細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用。 方法：實(shí)驗(yàn)分為三個(gè)部分: (1)第一部分：SLE患者實(shí)驗(yàn)部分：分離SLE患者外周血單個(gè)核細(xì)胞，于24孔平底培養(yǎng)板中，37℃、5％CO2的條件下孵育2h，棄除貼壁細(xì)胞，收集細(xì)胞懸液。用含10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。分組：對(duì)照組、DMSO組、5個(gè)Thd濃度組：2.5、25、100、

2、300、500μ g/ml，培養(yǎng)72h后用MTT比色法檢測(cè)T淋巴細(xì)胞增殖的情況，培養(yǎng)24h后用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)T淋巴細(xì)胞早期凋亡及CD3+T淋巴細(xì)胞CD28表達(dá)和CD8+T淋巴細(xì)胞CD152表達(dá)，培養(yǎng)72h后用Real—time PCR檢測(cè)T淋巴細(xì)胞IL-6、IL-10、TNF—α mRNA水平。 (2)第二部分：SD大鼠滑膜細(xì)胞部分：選用正常SD大鼠，膠原酶和胰蛋白酶消化法分離培養(yǎng)大鼠成纖維樣滑膜細(xì)胞(FLS)，傳至第

3、3代時(shí)加Thd干預(yù)。分組：對(duì)照組、DMSO組(溶媒組)、Thd組(3個(gè)濃度：300、500、800μ g/ml)。培養(yǎng)24h后MTT法檢測(cè)FLS的增殖、Annexin V/PI法FCM檢測(cè)滑膜細(xì)胞凋亡。 (3)第三部分：RA患者實(shí)驗(yàn)部分：分組：按照疾病活動(dòng)性評(píng)分(DAS)分為RA病情活動(dòng)組、RA病情穩(wěn)定組和健康對(duì)照組。取RA患者外周血單個(gè)核細(xì)胞，免疫磁珠陰選CD4+T淋巴細(xì)胞，用PMA/Ion刺激，同時(shí)加Thd干預(yù)6小時(shí)，經(jīng)固定

4、/透膜處理進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)染色，F(xiàn)CM檢測(cè)CD4+T細(xì)胞內(nèi)IL-17表達(dá)水平。 結(jié)果： (1)在體外，與對(duì)照組相比，500μ g/ml Thd能抑制CD3+T淋巴細(xì)胞CD28表達(dá)和促進(jìn)T淋巴細(xì)胞早期凋亡，100μ g/ml～500μ g/mlThd能抑制T淋巴細(xì)胞的增殖，并促進(jìn)CD8+T淋巴細(xì)胞CD152表達(dá)，各劑量組均抑制IL-6、IL-10、TNF—α mRNA表達(dá)。 (2)Thd可抑制FLS的增殖，其抑制作用呈劑