肥大細胞在胃癌中分布、表型及其免疫抑制作用的初步研究.pdf

1、胃癌是最常見的腫瘤之一,其死亡率在腫瘤中位居第二。盡管關于胃癌的診斷方法和治療藥物的研究非常廣泛,晚期的胃癌患者仍具有不良的預后以及較差的生活質量,其治療方法依然只是依賴于傳統(tǒng)的細胞毒性化療。
　　研究證明,腫瘤微環(huán)境在塑造腫瘤成型及腫瘤演化中的作用越來越重要。腫瘤微環(huán)境由多種成分組成,包括細胞器,腫瘤克隆群,基質細胞如上皮細胞,成纖維細胞,血管上皮細胞,以及多種固有性和適應性免疫細胞。胃癌實體瘤中的細胞除了有癌細胞外,還包含腫瘤

2、微環(huán)境中固有成分及遷移進來的細胞。腫瘤微環(huán)境中的各個免疫細胞間的調控,對胃癌的進程有著重要的影響,這些免疫細胞很有可能成為未來胃癌治療的靶點。
　　肥大細胞來源于骨髓,在骨髓中作為未成熟的祖細胞遷移到外周組織則分化為成熟細胞。先前的研究表明,肥大細胞在變態(tài)反應及病原體感染免疫應答中發(fā)揮重要生物學作用。最新的研究表明,肥大細胞被認為是腫瘤微環(huán)境的調控因子,它主要可以通過以下幾個方面影響腫瘤的進程,首先,肥大細胞與血管生成關系密切,通

3、過分泌促血管生成因子或與其他細胞相互作用來促進血管生成從而促進腫瘤生長;其次肥大細胞可以促進組織內重塑促進腫瘤的生長和轉移;再次,肥大細胞通過免疫調節(jié)影響腫瘤生長。但是,在人類腫瘤微環(huán)境中肥大細胞到底是發(fā)揮怎樣的作用,促腫瘤還是抑制腫瘤的作用,需要我們進一步研究。盡管越來越多的研究證據表明肥大細胞在腫瘤中侵潤增加,其功能機制的研究還在探索中,其在腫瘤微環(huán)境中的準確的作用還不完全知道。在胃癌中,肥大細胞的分布、表型以及功能至今尚未明確,亟

4、待研究。
　　目的:
　　1.明確肥大細胞在胃癌中的分布;
　　2.研究肥大細胞在胃癌中的表型特征和趨化因子受體的表達。
　　3.初步探討肥大細胞在胃癌中的免疫抑制功能。
　　方法:
　　1.肥大細胞在胃癌中的分布及表型檢測
　　在重慶西南醫(yī)院普外科收集胃癌病人新鮮外周血和胃癌組織標本。采用流式細胞術,檢測肥大細胞的分布情況。運用免疫組化染色檢測肥大細胞的原位分布。H&E染色明確胃組織病理學情況

5、。流式細胞術分析MC細胞表型。
　　2.肥大細胞在胃癌中的表型特征和趨化因子受體的表達
　　采用流式細胞術檢測胃癌中肥大細胞共刺激分子CD80、CD86和HLA-DR的表達,并篩選趨化因子受體。
　　3.肥大細胞系(HMC-1)與胃癌細胞系共培養(yǎng)及炎性細胞因子檢測。
　　將HMC-1細胞和BGC-823細胞按1:1的比例,或單獨加BGC-823細胞,或單獨加HMC-1細胞,收集培養(yǎng)上清,ELISA檢測IL-6及T

6、NF-ɑ蛋白水平。
　　4.HMC-1細胞對人CD3+T細胞的增殖的調控作用
　　分別用胃癌組織培養(yǎng)上清、正常胃組織培養(yǎng)上清、胃細胞系培養(yǎng)(AGS)上清及胃上皮細胞系(GES-1)培養(yǎng)上清,刺激HMC-1細胞使成為條件性HMC-1細胞,磁珠分選正常人外周血CD3+T細胞,并CSFE標記,與刺激后的HMC-1細胞共培養(yǎng),分別在5天后,收集細胞并上流式細胞儀檢測,分析T細胞的增殖情況。
　　結果:
　　1.肥大細胞在

7、胃癌中的分布。
　　1.1胃癌患者和健康人外周血肥大細胞的比例分別為0.892％、1.22%,經統(tǒng)計學分析胃癌患者外周血中肥大細胞的百分比與正常人外周血的相比無明顯差異(P>0.05)。肥大細胞在胃癌組織、癌旁組織及正常組織中占CD45+細胞的比例分別為14.39%,11.77%和11.81%;經分析胃癌組織中的肥大細胞的百分比較癌旁組織和正常組織顯著增高(P<0.05)。
　　1.2免疫組化結果顯示,相比于正常組織肥大細胞

8、在胃癌組織中明顯浸潤。上述結果提示,肥大細胞在胃癌微環(huán)境中浸潤增高。
　　2.胃癌中肥大細胞表型特征和趨化因子受體表達情況。
　　2.1胃癌組織中浸潤的肥大細胞較其他組織表達共刺激分子CD80,CD86無明顯差異,但高表達HLA-DR。這提示胃癌組織中的肥大可能具有免疫抑制表型。
　　2.2胃癌組織中的肥大細胞幾乎不表達趨化因子受體CCR2,CXCR2,CXCR3,但高表達CXCR4。而癌旁組織和非腫瘤正常組織表達CX

9、CR4的肥大細胞顯著降低。
　　3. HMC-1細胞對胃癌細胞系分泌炎性因子的影響。
　　在肥大細胞系HMC-1和胃癌細胞系BGC-823細胞共培養(yǎng)體系中,單獨培養(yǎng)BGC-823則有較多IL-6,TNF-ɑ分泌,而在BGC-823細胞培養(yǎng)過程中加HMC-1細胞后,TNF-ɑ、IL-6蛋白水平明顯降低(P<0.05);說明肥大細胞能抑制胃癌腫瘤細胞的促炎癥作用,間接說明肥大細胞具有一定的免疫抑制功能。
　　4. HMC-

10、1細胞對CD3+T細胞的增殖的調控作用
　　腫瘤組織培養(yǎng)上清,胃癌腫瘤細胞系培養(yǎng)上清刺激后的HMC-1細胞相比正常組織培養(yǎng)上清,胃正常細胞系培養(yǎng)上清,能明顯抑制CD3+T細胞的增殖。
　　結論:
　　1.肥大細胞在胃癌組織中侵潤增加,并具有免疫抑制表型。
　　2.胃癌組織中的肥大細胞高表達CXCR4。
　　3. HMC-1抑制胃癌腫瘤細胞系的促炎作用。
　　4.條件性的HMC-1抑制CD3+T細胞的增