組胺H4受體在人類肥大細胞中的作用及其機制研究.pdf

1、目的：組胺H4受體是近年來新發(fā)現(xiàn)的組胺受體，主要表達于免疫器官及免疫細胞上。研究表明，組胺H4受體參與多種免疫性疾病的免疫炎癥反應并介導角質(zhì)形成細胞、嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞等的炎癥反應。肥大細胞膜表面有H4受體的分布，也是組胺的效應細胞。本實驗研究組胺H4受體對人肥大細胞系LAD2細胞表達炎癥因子IL-8、TNF-α的影響及其活化的信號通路，以初步探討H4受體通過肥大細胞參與免疫炎癥反應的分子生物學機制。
　　方法：1、人肥大

2、細胞系LAD2細胞的培養(yǎng)；2、通過組胺H4受體激動劑Clobenpropit刺激肥大細胞脫顆粒及細胞因子IL-8、TNF-α分泌，觀察組胺H4受體激活對LAD2細胞生物學功能的影響；3、探討組胺H4受體的激活對Calcium-鈣調(diào)磷酸酶-NFAT、PI3K-Akt、MAPKs（JNK、P38及Erk）、NF-κB信號通路的影響。
　　結果：1、用組胺H4受體激動劑Clobenpropit刺激人肥大細胞LAD2，不能引起LAD2細胞

3、脫顆粒，但引起LAD2細胞釋放IL-8和TNF-α；2、組胺H4受體激動劑Clobenpropit刺激人肥大細胞LAD2，能引起鈣動員，Erk、P38、JNK磷酸化，NFAT、NF-κB活化，但對Akt磷酸化沒有影響；3、PI3K抑制劑Wortmannin、Erk抑制劑PD98059、鈣調(diào)磷酸酶抑制劑Cyclosporin A能明顯抑制Clobenpropit刺激LAD2細胞引起的IL-8和TNF-α釋放，與此相反，P38抑制劑SB20

4、385能明顯促進Clobenpropit刺激LAD2細胞分泌IL-8和TNF-α，JNK抑制劑SP600125級NF-κB抑制劑Bay11-7821對Clobenpropit刺激引起LAD2細胞釋放IL-8和TNF-α沒有影響。
　　結論：組胺H4受體激動劑沒有引起LAD2細胞脫顆粒，但引起LAD2細胞炎癥因子IL-8及TNF-α的釋放，說明該受體可能與過敏反應的遲發(fā)相有關。組胺H4受體激動劑可以刺激LAD2細胞鈣動員，并引起ER

5、K、JNK、NFAT的活化，加入相應的抑制劑后炎癥因子釋放減少，說明其在人肥大細胞分泌炎癥因子的通路與Calcium-鈣調(diào)磷酸酶-NFAT及MAPKs（JNK、P38及Erk）信號通路途徑相關。組胺H4受體激動劑能引起LAD2細胞P38活化，然而加入相應的抑制劑后炎癥因子釋放增加，說明P38信號通路對組胺H4受體信號傳導有負調(diào)控作用。組胺H4受體激動劑能引起LAD2細胞NF-κB活化，然而加入相應的抑制劑后炎癥因子釋放無明顯變化，提示N