幾株昆蟲(chóng)病原菌微菌核的誘導(dǎo)培養(yǎng)和條件優(yōu)化.pdf

1、蠐螬、蟋蟀、根蝽、白蟻等地下害蟲(chóng)一生中大部分在土壤中生活,為害植物地下部或地面附近根莖部?，F(xiàn)在對(duì)它們的防治一般采用化學(xué)農(nóng)藥,在用昆蟲(chóng)病原真菌防治地下害蟲(chóng)的研究中,布氏白僵菌防治蠐螬的報(bào)道較多,但由于地下害蟲(chóng)常在土壤深層棲息,活動(dòng)量小,一般在春秋季才向土表移動(dòng),且在旱作地區(qū)普遍發(fā)生,普通的孢子制劑可能因儲(chǔ)藏期或施放后無(wú)法適應(yīng)氣候環(huán)境的變化,而影響防治效果。因此需要一種耐干旱、易儲(chǔ)藏的繁殖體來(lái)防治地下害蟲(chóng)。
　　本研究通過(guò)改變營(yíng)養(yǎng)條件

2、在液體培養(yǎng)中人工誘導(dǎo)產(chǎn)生微菌核(Microsclerotia,以下簡(jiǎn)稱MS),結(jié)果表明氮源種類的選擇決定是否產(chǎn)生MS,且不同菌種產(chǎn)MS的最佳氮源不盡相同,不添加吐溫-80對(duì)MS產(chǎn)生也無(wú)影響;通過(guò)一系列的單因素實(shí)驗(yàn),從球孢白僵菌、布氏白僵菌、金龜子綠僵菌共9個(gè)菌株中各篩選1株高產(chǎn)MS的菌株Bb2729、Bbr17和Ma55。其在碳含量32g/L時(shí)MS產(chǎn)量分別為3.87×103MS/mL、6.80×103MS/mL和4.07×103MS/m

3、L。
　　單因素實(shí)驗(yàn)為基礎(chǔ),進(jìn)行碳氮源用量比例復(fù)篩,發(fā)現(xiàn)MS產(chǎn)量和生物量均受碳源濃度和碳氮比共同作用,并通過(guò)對(duì)接種量等非營(yíng)養(yǎng)條件的單因素實(shí)驗(yàn),確定進(jìn)一步優(yōu)化方案。以碳濃度、碳氮比、搖床轉(zhuǎn)速、孢懸液接種量和培養(yǎng)液裝液量為五個(gè)因子,MS產(chǎn)量和生物量為響應(yīng)值,進(jìn)行兩水平部分因子實(shí)驗(yàn),篩選顯著影響因子,結(jié)果Bb2729、Bbr17和Ma55三株菌的顯著因子均為碳濃度、碳氮比和接種量;最陡爬坡實(shí)驗(yàn)確定響應(yīng)面的中心點(diǎn),Bb2729:碳濃度27

4、g/L、碳氮比8:1、接種量0.9％,Bbr17:碳濃度30g/L、碳氮比7:1、接種量1.0%,Ma55:碳濃度30g/L、碳氮比35:1、接種量0.85%;Box-Benhnken中心復(fù)合實(shí)驗(yàn)確定MS產(chǎn)量的理論最大值,其中布氏白僵菌Bbr17產(chǎn)量最高為8.24×103MS/mL(碳濃度27.07g/L、接種量0.84%、碳氮比7.29:1),其次是球孢白僵菌Bb2729:5.57×103MS/mL(碳濃度27.07g/L、接種量0.

5、84%、碳氮比7.29:1),金龜子綠僵菌Ma55:4.63×103MS/mL(碳濃度30.29g/L、接種量0.84%、碳氮比34.66:1);理論值條件下分別對(duì)各株菌進(jìn)行三批次驗(yàn)證試驗(yàn),結(jié)果與理論值相比均在1%誤差以內(nèi),說(shuō)明了響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。
　　MS的耐旱實(shí)驗(yàn),將三株真菌碳氮比復(fù)篩時(shí)各個(gè)實(shí)驗(yàn)組得到的發(fā)酵產(chǎn)物,加硅藻土(diatomite,以下簡(jiǎn)稱DE),抽濾凍干粉碎制成MS-DE粉末,在4℃冷藏條件下,4個(gè)月時(shí)復(fù)蘇率

6、仍維持在90%以上,低碳、高碳氮比發(fā)酵得到的MS復(fù)蘇率高達(dá)到100%。
　　MS-DE短期恒溫儲(chǔ)存試驗(yàn)表明,溫度是影響MS儲(chǔ)藏期的重要因素,在4℃冷藏條件下,MS-DE復(fù)蘇率下降速度緩慢,60天后復(fù)蘇率仍維持在98%以上。在31℃條件下,MS-DE復(fù)蘇下降趨勢(shì)顯著增強(qiáng),但均在也87%以上,相比之下布氏白僵菌
　　MS更耐儲(chǔ)藏,31℃儲(chǔ)藏60天復(fù)蘇率仍能達(dá)到91.93±1.58%。劑型化對(duì)MS復(fù)蘇率有一定影響,但的確有一定保護(hù)