微小隱孢子蟲鼠基因型CP15-60與CP41基因的克隆和表達(dá)及上海地區(qū)某豬場豬隱孢子蟲感染情況調(diào)查.pdf

1、隱孢子蟲是一種嚴(yán)重危害人和動物健康的全球性介水性人獸共患寄生原蟲，廣泛寄生于人、哺乳動物、鳥類、爬行類和魚類的消化道和呼吸道中。對免疫功能低下的人和動物，隱孢子蟲感染病情嚴(yán)重，遷延不愈，甚至危及生命。隱孢子蟲病至今尚無有效的治療藥物和疫苗，亟待發(fā)展靈敏、快捷的病原檢測和高效的免疫預(yù)防技術(shù)。 本研究利用RT-PCR方法成功克隆了上海地區(qū)分離的微小隱孢子蟲鼠基因型子孢子表面抗原CP15/60基因和卵囊壁蛋白CP41基因，克隆的目的基

2、因核苷酸序列與GenBank登錄的源自微小隱孢子蟲牛基因型的基因序列比較，同源性分別為98.66％和90.50％。 成功構(gòu)建了微小隱孢子蟲鼠基因型的原核重組表達(dá)質(zhì)粒pET-28b(+)-CP15/60和pGEX-5x-3-CP41，實現(xiàn)了CP15/60和CP41基因在大腸桿菌中的表達(dá)。Western-blot分析顯示，表達(dá)的重組蛋白可被兔抗微小隱孢子蟲血清識別。重組蛋白經(jīng)3次免疫后，SPF兔血清特異性抗體達(dá)到較高水平，表明表達(dá)的

3、重組蛋白具有良好的反應(yīng)原性和免疫原性。 以純化的重組表達(dá)蛋白CP15/60和CP41為包被抗原，分別建立了隱孢子蟲病的間接ELISA診斷技術(shù)，對實驗室收集保存的微小隱孢子蟲兔基因型卵囊感染兔陽性血清及鏡檢隱孢子蟲為陰性的正常兔血清進(jìn)行檢測，結(jié)果表明，建立的間接ELISA診斷技術(shù)具有較高的敏感性和特異性。 系統(tǒng)、廣泛地開展流行病學(xué)調(diào)查是有效預(yù)防隱孢子蟲病的前提和基礎(chǔ)。本研究對上海市某豬場不同日齡的仔豬進(jìn)行了隱孢子蟲病感染情

4、況調(diào)查，共檢測1629份糞樣，感染率為31.55％。一年中，冬、春兩季感染率最高、秋季次之，夏季最低。豬感染率與日齡相關(guān)，其中30d-39d和40d-49d兩個日齡段的感染率最高，分別為58.54％和43.30％。30日齡以下仔豬和90日齡以上育肥豬的隱孢子蟲感染率較低。隱孢子蟲感染強(qiáng)度與豬齡密切相關(guān)，豬齡越小，感染強(qiáng)度越大。 上述工作的開展，為逐步掌握上海地區(qū)豬隱孢子蟲病流行狀況和特點提供了基礎(chǔ)，對于進(jìn)一步防控該病具有重要意義