人源隱孢子蟲動物模型的建立與隱孢子蟲種系發(fā)育關(guān)系分析.pdf

1、隱孢子蟲病是一種重要的人獸共患的原蟲病，目前尚無用于治療隱孢子蟲病的特效藥物。線粒體是真核生物中擁有蛋白和酶最多的細胞器，因而隱孢子蟲線粒體也可能成為藥物潛在的作用靶位。最近一些研究表明隱孢子蟲存在線粒體誘生的細胞器，但和其他原生動物的線粒體存在著差異。隱孢子蟲具有退化的線粒體，但缺少線粒體基因組，完全依賴核基因來編碼所需的功能蛋白。 1.為了評價兩種常用免疫抑制方法對小白鼠排卵囊規(guī)律的影響。作者將19日齡小白鼠隨機分成兩組，第

2、一組通過飲水給予地塞米松，第二組采用導胃管灌服地塞米松。第3天，兩組中每只小白鼠灌胃接種人源隱孢子蟲，每只小白鼠感染量為1.5×106個卵囊。結(jié)果：兩組均在感染的當天就有卵囊排出，感染后第6天糞便卵囊計數(shù)明顯增加，隨之出現(xiàn)3個高峰期，此后逐漸下降。免疫抑制組小白鼠在卵囊持續(xù)期不斷有死亡但無腹瀉癥狀。結(jié)論：用這兩種免疫抑制方法，均能成功感染人源隱孢子蟲，但通過灌服地塞米松可使小白鼠獲得更高的OPG(每克糞便中的卵囊數(shù))值和更長的排卵囊持續(xù)

3、期。 2.為了近一步了解人源隱孢子蟲在小白鼠體內(nèi)的內(nèi)生發(fā)育情況。作者采用19日齡昆明系小白鼠作為模型動物，隨機分成8組，分3個感染劑量進行人源隱孢子蟲分離株感染系列篩選試驗，并確定隨劑量和時間不同對人源隱孢子蟲在小白鼠寄生部位的影響。感染后于4H、8H、12H、48H、72H破殺高劑量組。4D、6D、9D、12D，16D，20D破殺中劑量組。取每只小白鼠的消化道和其他臟器用福爾馬林固定，作組織切片觀察人源隱孢子蟲在小白鼠體內(nèi)的寄

4、生部位和內(nèi)生發(fā)育情況。結(jié)果表明隱孢子蟲主要寄生在小白鼠十二指腸、空腸和回腸。在感染早期主要寄生在空腸和回腸，在感染中后期主要寄生在十二指腸和空腸。 3.為了從分子上了解本試驗室所分離到隱孢子蟲株所屬的種或基因型，作者對所分離到隱孢子蟲種株進行PCR擴增18SrRNA基因全序列和HSP70基因序列，并對PCR擴增片段進行測序，然后利用ClustalX、DNAstar和Paup等軟件對其進行序列分析比較、構(gòu)建分子進化樹，試圖從分子上

5、證明河南省不同地區(qū)不同種類隱孢子蟲的遺傳特征，以闡明隱孢子蟲病的分子流行病學特點。通過18SrRNA基因全序列和HSP70序列分析，河南人源隱孢子蟲分離株為小球隱孢子蟲鼠基因型；河南鹿源隱孢子蟲分離株不同與小球隱孢子蟲鹿基因型；河南豬源隱孢子蟲的兩個分離株均為小球隱孢子蟲豬基因型，即豬隱孢子蟲；河南鵪鶉源的隱孢子蟲兩個分離株分別為貝氏隱孢子蟲和火雞隱孢子蟲；河南烏雞隱孢子蟲和鴕鳥隱孢子蟲分離株均為貝氏隱孢子蟲；河南牛源隱孢子蟲分離株為安

6、氏隱孢子蟲。 4.本試驗以核編碼的線粒體功能性蛋白基因Cpn60，AOX和PNO作為研究對象，對實驗室分離到隱孢子蟲分離株進行擴增測序，以確定在動物源隱孢子蟲線粒體相關(guān)基因是否存在，對擴增出的序列進行比對分析構(gòu)建進化樹，以確定不同隱孢子蟲株之間的進化關(guān)系，并與18SrRNA基因和HSP70基因構(gòu)建的進化樹作對照，進而評價這些基因是否更適合作為隱孢子蟲分類和進化關(guān)系的基因座。結(jié)果通過CPN60、AOX和PNO基因編碼序列構(gòu)建進化樹