禽類(lèi)隱孢子蟲(chóng)調(diào)查及防治抗體研制.pdf

1、寄生于禽類(lèi)的隱孢子蟲(chóng)有效種為3個(gè)即C.meleagridis，C.baileyi，C.galli，其中C.meleagridis作為人隱孢子蟲(chóng)病的第三大感染種類(lèi)已引起廣泛的關(guān)注?；诖耍髡邔?duì)河南省部分地區(qū)的禽類(lèi)（鴕鳥(niǎo)、鴨、雞、鵪鵓）進(jìn)行了隱孢子蟲(chóng)流行病學(xué)調(diào)查，掌握了其流行特點(diǎn)。并利用收集獲得的雞源C.baileyi卵囊進(jìn)行了卵黃抗體的制備與鑒定研究，為進(jìn)一步開(kāi)展應(yīng)用抗隱孢子蟲(chóng)特異性IgY抗體進(jìn)行隱孢子蟲(chóng)病的治療與診斷提供基礎(chǔ)。

2、　　 2006年6月～2007年7月，對(duì)河南地區(qū)6個(gè)鴕鳥(niǎo)養(yǎng)殖場(chǎng)、8個(gè)鴨場(chǎng)、8個(gè)規(guī)?；u場(chǎng)和37個(gè)中小規(guī)模雞養(yǎng)殖戶(hù)、47個(gè)鵪鶉養(yǎng)殖場(chǎng)的禽類(lèi)進(jìn)行了調(diào)查。糞便樣品中隱孢子蟲(chóng)的檢測(cè)用飽和蔗糖溶液漂浮法和改良抗酸染色法進(jìn)行。結(jié)果顯示鴕鳥(niǎo)隱孢子蟲(chóng)感染率為1.7％(14/829)，鴨隱孢子蟲(chóng)陽(yáng)性率為16.31％(92/564)，蛋雞、種雞隱孢子蟲(chóng)感染率為10.57％(163/1542)、肉雞感染率為3.17％(15/473)，鵪鶉隱孢子蟲(chóng)感染率為1

3、3.15％(239/1818)。統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)分析表明幼齡鴕鳥(niǎo)和雛鴨較易感染隱孢子蟲(chóng)，對(duì)于雞，0～31、31～60d的雛雞和121～180d初產(chǎn)蛋雞感染率相對(duì)較高，育成雞(60～120d)和產(chǎn)蛋雞（180d以后）的感染率相對(duì)較低。根據(jù)形態(tài)學(xué)鑒定，寄生于鴕鳥(niǎo)、鴨、雞的隱孢子蟲(chóng)為C.baileyi，而寄生于鵪鵓的隱孢子蟲(chóng)除了C.baileyi外，尚感染有C.meleagridis。
　　 利用實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增后的雞源C.baileyi卵囊，以改

4、進(jìn)的Sheather蔗糖梯度離心法提純卵囊，低速離心結(jié)合濾膜微濾除菌后，通過(guò)反復(fù)凍融和超聲波處理的全卵囊抗原，以福氏完全和非完全佐劑制備免疫抗原，設(shè)定4種免疫程序，免疫5月齡開(kāi)產(chǎn)健康母雞。結(jié)果顯示首免、二免劑量均為5×107個(gè)/只，免疫間隔6周，2次免疫的第一組，每次免疫劑量均為1×107個(gè)/只，免疫間隔15～20天，4次免疫的第三組不能取得好的免疫效果，應(yīng)用免疫抗原量梯度增加的免疫方法的第二組，取得了滿(mǎn)意的抗體水平，一免、二免抗原量分

5、別為1×107個(gè)/只，2×107個(gè)/只，三免、四免抗原量均為3×107個(gè)/只，五免、六免抗原量均為5×107個(gè)/只，每次免疫間隔15～20d，共免6次。采用間接ELISA法和免疫熒光法對(duì)獲得的卵黃抗體進(jìn)行初步鑒定，其具有隱孢子蟲(chóng)屬特異性。以水稀釋-鹽析法純化本次實(shí)驗(yàn)獲得的IgY抗體，經(jīng)SDS-PAGE分析后，卵黃抗體未提純前呈現(xiàn)12條以上清晰蛋白條帶，主要的有136KDa、74KDa、62KDa、49KDa和33KDa蛋白條帶，提純后的