河南省斷奶前犢牛隱孢子蟲種類及基因型研究.pdf

1、隱孢子蟲病（Crytosoridiosis）是一種全球性的人獸共患寄生性原蟲病，其病原隱孢子蟲（Cryptosporidium）是一種常見的人獸共患原蟲，可以感染廣泛的脊椎動(dòng)物宿主。近年來，基于分子生物學(xué)技術(shù)的研究，從奶牛中鑒定出8個(gè)隱孢子蟲種類和2個(gè)基因型，包括C.parvum,C．bovis,C.andersoni,C.ryanae,C.felis，C.hominis,C.suis,C.canis,C.suis-likegenoty

2、pe和Cryptosporidium pig genotypeⅡ，其中，微小隱孢子蟲Cparvum為重要的感染人的隱孢子蟲種類。
　　 為了解水牛腸道寄生蟲感染情況，采用盧戈氏碘液染色法、離心沉淀法、飽和蔗糖溶液漂浮法和改良抗酸染色法對信陽市李家寨和張家寨散養(yǎng)的成年水牛的共357份新鮮糞便樣品進(jìn)行腸道寄生蟲感染情況調(diào)查。結(jié)果發(fā)現(xiàn)302份樣品呈陽性，寄生蟲總感染率為84.59％，其中水牛球蟲感染率最高，達(dá)76.75%，水牛隱孢子蟲

3、、環(huán)孢子蟲、吸蟲、圓線蟲、仰口線蟲、鞭蟲、絳蟲感染率分別為3.36%，2.52%，7.07%，25.77%，9.80%，4.76%，0.56%。本次調(diào)查為臨床治療和預(yù)防水牛腸道寄生蟲病提供了參考和依據(jù)。
　　 為建立國內(nèi)牛源C parvum新生犢牛動(dòng)物模型，將牛源C.parvum卵囊用導(dǎo)管灌胃接種1頭3日齡未吃初乳的荷斯坦公犢牛，對排卵囊規(guī)律、臨床表現(xiàn)及組織學(xué)和超微結(jié)構(gòu)進(jìn)行觀察。試驗(yàn)結(jié)果顯示，感染后3d有卵囊排出，感染后第7d糞

4、便卵囊計(jì)數(shù)明顯增加，出現(xiàn)高峰期。本試驗(yàn)成功感染新生犢牛，建立了C.parvum新生犢牛動(dòng)物模型，為C.parvum卵囊大量擴(kuò)增和進(jìn)一步研究其生物學(xué)特性等提供了重要的參考依據(jù)。
　　 為了解河南省斷奶前犢牛隱孢子蟲感染情況，用福爾馬林-乙酸乙酯離心沉淀法、飽和蔗糖溶液漂浮法和改良抗酸抗酸染色法，對河南省鄭州、中牟、新密、新鄉(xiāng)、洛陽、焦作和商丘7個(gè)地區(qū)8個(gè)奶牛場792份斷奶前犢牛糞便樣品進(jìn)行檢查。結(jié)果表明，8個(gè)奶牛場中隱孢子蟲感染率

5、最高為26.77%(34/127)，最低為10.479%(9/86)，總感染率21.12%(168/792)。各個(gè)年齡段中，2周齡犢牛感染率最高，達(dá)33.08%(44/133)，1周齡感染率最低，為7.27%(4/55)。共發(fā)現(xiàn)2種不同形態(tài)的隱孢子蟲卵囊，依據(jù)形態(tài)數(shù)值初步鑒定為C.parvum和C.andersoni。本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)C.par vum在斷奶前犢牛中具有較高的感染率，具有重要的公共衛(wèi)生意義。
　　 為了解河南省斷奶前

6、犢牛隱孢子蟲感染情況及評估斷奶前犢牛在隱孢子蟲人獸共患傳播中的作用，本試驗(yàn)利用巢式Nested PCR對168個(gè)斷奶前隱孢子蟲分離株18SrRNA基因和60-kDa糖蛋白(GP60)基因特定片段進(jìn)行擴(kuò)增，然后利用限制性內(nèi)切酶SspI和MboⅡ?qū)CR-18SrRNA基因產(chǎn)物進(jìn)行消化酶切進(jìn)行PCR-RLFP分析初步確定隱孢子蟲種類。通過進(jìn)一步對擴(kuò)增片段進(jìn)行測序和序列比對，共鑒定出4個(gè)隱孢子蟲種類和基因型，包括微小隱孢子蟲（C.parvum

7、）、牛隱孢子蟲（C.bovis）、瑞氏隱孢子蟲（C.ryanae）和安氏隱孢子蟲（C.andersoni）。其中，微小隱孢子蟲（C.parvum）和牛隱孢子蟲（C.bovis）為斷奶前犢牛盼優(yōu)勢蟲株感染率均為38.46%(65/157)，出現(xiàn)在各個(gè)年齡段（1周齡～2月齡）。GP60序列分析表明，斷奶前犢牛的微小隱孢子蟲（C.par vum）GP60亞型均為Ⅱd亞型家族，命名為ⅡdA19G1。
　　 本研究表明，河南省斷奶前犢牛微