在高植物蛋白飼料中添加膽固醇、?；撬岷痛蠖乖磉皩Υ罅怫疑L性能和膽固醇代謝的影響.pdf

1、以我國重要海水肉食性養(yǎng)殖魚類大菱鲆(Scophthalmus maximus L.)為實驗對象，在室內(nèi)流水養(yǎng)殖系統(tǒng)中進行攝食生長實驗，研究高植物蛋白飼料中添加膽固醇、?；撬岷痛蠖乖磉耙约跋揎曀綄Υ罅怫疑L性能和膽固醇代謝的影響。在此基礎(chǔ)上探討植物蛋白降低魚類血漿膽固醇的機制。本文的研究內(nèi)容和主要研究結(jié)果如下：
　　 1、高植物蛋白飼料中添加膽固醇對大菱鲆幼魚攝食、生長和膽固醇代謝的影響
　　 用添加膽固醇的高植物蛋白飼

2、料飼喂大菱鲆(Scophthalmus maximus L.)幼魚9周，研究其對大菱鲆攝食、生長和膽固醇代謝的影響。實驗設(shè)計了5組等氮等脂飼料，以含魚粉58％的飼料作為基礎(chǔ)飼料(FM)，而其它4組飼料均含14.5％的魚粉、42.0％豆粕和18.5％谷朊粉，在這4組飼料中分別補充0.0％(C-0.0％)、0.5％(C-0.5％)、1.0％(C-1.0％)和1.5％(C-1.5％)的膽固醇，其實測值分別為0.30％、0.77％、1.25％和

3、1.78％，而基礎(chǔ)飼料中膽固醇檢測值為0.63％。結(jié)果表明，攝食飼料FM的大菱鲆增重率和飼料效率均顯著高于其它飼料組(P<0.05)。與C-0.0％組相比，攝食飼料C-1.0％組顯著提高了大菱鲆幼魚的攝食率、增重率和血漿及肝臟膽固醇水平(P<0.05)。與C-1.0％組相比，攝食飼料C-1.5％組顯著抑制了實驗魚的增重率和攝食率(P<0.05)。當(dāng)飼料中膽固醇含量為1.25％(C-1.0％)時，其全魚脂肪含量最高，且顯著高于其它處理組(

4、P<0.05)。飼料中膽固醇含量與血漿中總膽固醇、游離膽固醇、膽固醇酯、高密度脂蛋白膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇的含量、肝臟中總膽固醇、膽固醇酯的含量及糞便中總膽固醇的含量呈顯著相關(guān)關(guān)系，相關(guān)系數(shù)均大于0.74。飼料中含有0.30％的膽固醇(C-0.0％)，其糞便總膽汁酸含量和肝臟膽固醇7A羥化酶的活性在所有處理組中最低。該研究結(jié)果表明，高植物蛋白飼料中含有1.25％的膽固醇有利于大菱鲆幼魚的生長，且對其生理狀態(tài)無不良影響。
　　

5、 2、大菱鲆HMG-CoAr基因的克隆、序列分析以及膽固醇添加到高植物蛋白飼料中對肝臟HMG-CoAr基因mRNA表達量的影響
　　 以大菱鲆(Scophthalmus maximus L.)為實驗材料，利用同源克隆技術(shù)和RACE技術(shù)從大菱鲆肝臟中成功擴增出3-羥基-3-甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶(3-hydroxy-3-methylglutaryl-Coenzyme A reductase，HMG-CoAr)cDNA的全序列。

6、HMG-CoAr基因cDNA全長序列為3048 bp(Genbank No：JN542428)，其中包括一個有2664 bp的開放閱讀框且編碼887個氨基酸，預(yù)測分子量約為96.52kDa，理論等電點為6.44。BLAST分析顯示大菱鲆HMG-CoAr基因與其它已知脊椎動物具有高度同源性，且N-端和C-端高度保守，僅連接N-端和C-端的中間疏水部分變異較大。序列分析指出HMG-CoAr基因在N-端氨基酸部分包括5個主要的跨膜域。實時定量

7、PCR技術(shù)檢測了全魚粉組(FM)、高植物蛋白組(C-0.0％)和高植物蛋白組基礎(chǔ)飼料中添加1.0％的膽固醇(C-1.0％)對大菱鲆肝臟HMG-CoAr基因mRNA表達量的影響。結(jié)果表明，與攝食全魚粉組相比(DietFM)，攝食高植物蛋白飼料(C-0.0％)能顯著上調(diào)大菱鲆肝臟HMG-CoAr基因mRNA的表達(P<0.01)。然而，當(dāng)高植物蛋白飼料中補充1.0％的膽固醇則顯著抑制肝臟HMG-CoAr基因mRNA的表達量(P<0.01)。

8、該研究結(jié)果表明，充足的飼料膽固醇能夠顯著抑制HMG-CoAr基因mRNA的表達，膽固醇的合成受反饋調(diào)節(jié)機制控制。
　　 3、高植物蛋白飼料中添加膽固醇和牛磺酸對大菱鲆幼魚攝食、生長、膽固醇代謝以及肝臟HMG-CoAr基因mRNA表達量的影響
　　 在高植物蛋白飼料中添加膽固醇、?；撬峄蛲瑫r添加膽固醇和牛磺酸研究其對大菱鲆(Scophthalmus maximus L.)幼魚生長性能和膽固醇代謝的影響。實驗基礎(chǔ)飼料(對照組

9、)包括14.5％的魚粉和50％的粗蛋白，在基礎(chǔ)飼料中分別添加1.0％牛磺酸、1.0％膽固醇及1.0％膽固醇和1.0％?；撬岬幕旌衔?各組飼料分別命名為C-1.0％、T-1.0％和TC)，配制成等氮等脂的實驗飼料。實驗結(jié)果表明攝食飼料C-1.0％、T-1.0％和TC的大菱鲆增重率顯著高于對照組。其中攝食飼料TC的大菱鲆增重率最高，但與C-1.0％相比無顯著差異(P>0.05)。與攝食飼料C-1.0％相比，攝食飼料TC顯著降低了大菱鲆血漿總

10、膽固醇、游離膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇含量(P<0.05)。與對照組相比，攝食飼料C-1.0％能顯著提高實驗魚膽固醇7A羥化酶(CYP7A1)的活性(P＜0.05)，且攝食飼料T-1.0％CYP7A1活性最高。與攝食飼料C-1.0％相比，攝食飼料TC能顯著下調(diào)HMG-CoAr基因mRNA的表達量(P<0.05)。該研究結(jié)果表明，高植物蛋白飼料中添加1.0％膽固醇和1.0％的牛磺酸有利于大菱鲆的生長。
　　 4、飼料中添加大豆皂甙

11、對大菱鲆幼魚攝食、生長和膽固醇代謝的影響
　　 本實驗旨在研究大豆皂甙對大菱鲆幼魚(Scophthalmus maxmus L.)攝食、生長和膽固醇代謝的影響。以魚粉飼料為基礎(chǔ)飼料(對照組，不添加大豆皂甙)，分別在對照飼料基礎(chǔ)上添加0.3％(實際含量為0.25％)和0.6％(實際含量為0.5％)的大豆皂甙產(chǎn)品，配制出另外的2組實驗飼料。3組飼料大豆皂甙的含量分別為0.0％(Diet1)、0.25％(Diet2)和0.5％(Die

12、t3)。結(jié)果表明，與對照組相比，飼料中添加0.25％的大豆皂甙(Diet2)對實驗魚的攝食率、飼料利用率和生長無顯著影響。但與對照組相比，飼料中添加0.5％的大豆皂甙顯著抑制了實驗魚的生長(P<0.05)。血漿、肝臟和糞便膽固醇代謝相關(guān)指標(biāo)在各處理組間均無顯著差異。以上結(jié)果表明在魚粉為基礎(chǔ)的飼料中添加0.25％大豆皂甙對大菱鲆幼魚的生長沒有負(fù)面效應(yīng)，而添加0.5％大豆皂甙則顯著抑制大菱鲆幼魚的生長。各組間實驗魚血漿、肝臟和糞便膽固醇含量

13、無顯著差異，這表明在魚粉為基礎(chǔ)的飼料中添加大豆皂甙對實驗魚膽固醇代謝無顯著影響。
　　 5、限飼水平對大菱鲆幼魚生長性能、膽固醇代謝以及肝臟HMG-CoAr基因表達的影響
　　 以初始體重為6.4±0.1 g的大菱鲆幼魚為實驗研究對象，探討限飼水平對大菱鲆幼魚生長性能和膽固醇代謝的影響。實驗分為4組，對照組以表觀飽食投喂，其它3組攝食率相應(yīng)調(diào)整為表觀飽食的75％、50％和25％，并分別命名為100％組、75％組、50％組

14、和25％組。實驗結(jié)果表明，攝食率與大菱鲆增重率、血漿總膽固醇、游離膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇呈顯著的正相關(guān)關(guān)系(P<0.05)。而攝食率與肝臟總膽固醇、游離膽固醇及膽固醇酯呈顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系(P＜0.05)。與對照組相比，25％組的?；o酶A：膽固醇酰基轉(zhuǎn)移酶(ACAT)活性顯著降低(P<0.05)，且其活性與攝食率呈顯著正相關(guān)關(guān)系(P<0.05)。與對照組相比，攝食表觀飽食50％或25％的實驗組顯著上調(diào)了3-羥基-3