禽白血病病毒通過弱毒疫苗污染途徑對雞免疫機能及生產(chǎn)性能的影響.pdf

1、禽白血病病毒（Avian leukosis virus, ALV）是引起禽類發(fā)生腫瘤性疾病的一種重要病原，該病毒可引起禽的多種具有傳染性的良性腫瘤和惡性腫瘤，同時能導致感染機體發(fā)生嚴重的細胞和體液免疫抑制以及生長抑制，進而易與其他病原并發(fā)或混合感染，給養(yǎng)禽業(yè)帶來重大損失。為了防止ALV的流行，很多國家已實施了非常嚴格的凈化措施來控制ALV。但由于ALV傳播方式的廣泛性，使得ALV感染在我國及其它國家仍然普遍存在。除垂直傳播外，使用了被A

2、LV污染的弱毒疫苗被認為是ALV感染的另一重要途徑，不管是在中國還是其他國家都曾多次報道過ALV在弱毒疫苗中的污染。使用了被ALV污染的弱毒疫苗會給已經(jīng)完成ALV凈化的養(yǎng)殖企業(yè)帶來巨大損失。因此我們設計了人工模擬試驗，探究使用不同劑量ALV污染疫苗對海蘭褐雞的影響，并對ALV在弱毒疫苗中的污染進行了不同檢測方法的比較。
　　1．弱毒疫苗中禽白血病病毒污染對海蘭褐雞免疫機能及生產(chǎn)性能的影響
　　為了探究使用污染ALV的弱毒疫苗

3、后對雞的生產(chǎn)性能和免疫機能的影響，將不同劑量ALV-A摻入市售合格的馬立克氏病疫苗，接種到海蘭褐雞上；七日齡時分別接種ALV-A、ALV-J，并同時免疫NDV和AIV-H9滅活疫苗。結果表明，使用每羽份污染10 TCID50 ALV和50 TCID50 ALV兩種劑量的MDV疫苗后均造成了海蘭褐雞體重的下降，與使用未污染疫苗組相比差異顯著。其中使用污染50 TCID50 ALV的MDV疫苗組明顯低于使用污染10 TCID50 ALV的M

4、DV疫苗組。并且使用兩種ALV污染劑量的疫苗后MDV核酸含量與使用未污染組相比顯著降低。其中使用污染50 TCID50 ALV的MDV疫苗組顯著低于使用污染10 TCID50 ALV的MDV疫苗組。同時使用污染兩種劑量ALV的疫苗后NDV和AIV-H9的抗體滴度與使用無污染疫苗組相比顯著下降。其中使用污染50 TCID50 ALV的MDV疫苗組明顯低于使用污染10 TCID50 ALV的MDV疫苗組。并且，七日齡再次感染ALV后，生長及

5、免疫的抑制作用更加明顯。其中，再次感染ALV-J的組生長及免疫的抑制作用比再感染ALV-A的組更加明顯。本研究通過展示弱毒疫苗中ALV污染對海蘭褐雞生產(chǎn)性能及免疫機能的影響，提示我們在使用弱毒疫苗時要嚴防外源病毒的污染。
　　2．內(nèi)源性禽白血病病毒基因對分子生物學方法檢測弱毒疫苗中禽白血病病毒污染的干擾及鑒別
　　使用了污染有禽白血病病毒特別是A亞群ALV的弱毒疫苗是ALV感染途徑之一，而應用PCR檢測弱毒疫苗中ALV污染時

6、通常會受到雞染色體上內(nèi)源性ALV基因的干擾。目前國家標準的檢驗規(guī)程是將疫苗經(jīng)不同預處理后接種至雞胚成纖維細胞后盲傳并測定其細胞上清中p27抗原，但是很多企業(yè)不了解這一情況通過使用p27的PCR檢測方法檢測疫苗污染并引起很多糾紛，為了說明這一方法的不合理性，本研究針對ALV保守的群特異性抗原p27基因設計合成了兩對引物，應用兩對引物對不同來源SPF雞胚及其制備的雞胚成纖維細胞（CEF）進行PCR檢測時均為陽性，但雞胚的蛋清和細胞培養(yǎng)上清經(jīng)

7、ALV-p27抗原ELISA檢測均為陰性；應用上述引物對市售合格的雞馬立克氏病毒（MDV）、雞傳染性法氏囊病毒（IBDV）和禽痘病毒（FPV）等活疫苗進行PCR檢測時均為陽性，但應用本實驗室研制的雞外源性禽白血病病毒特異性核酸探針交叉斑點雜交檢測試劑盒卻均為陰性，并且應用核酸斑點雜交可檢測到10 TCID50/1000羽份的人為添加污染，顯示了良好的特異性和靈敏度。本研究表明在某些SPF雞胚及其制品中內(nèi)源性ALV基因對PCR檢測的干擾，