小麥黃花葉病毒全序列分析及蛋白互作和亞細(xì)胞定位.pdf

1、小麥黃花葉病是我國(guó)長(zhǎng)江、黃河中下游小麥產(chǎn)區(qū)的重要病毒病害，每年發(fā)生200萬(wàn)hm2，造成減產(chǎn)1.5×109kg，對(duì)我國(guó)糧食安全生產(chǎn)造成了重大的威脅。引起我國(guó)小麥黃花葉病的主要病原是小麥黃花葉病毒（Wheatyellow mosaic virus，WYMV）。WYMV屬于馬鈴薯Y病毒科（otyviridae），大麥黃花葉病毒屬（Bymovirus），其基因組為兩條正單鏈RNA，分別包裝在不同的粒子內(nèi)。該病毒通過(guò)土壤中的禾谷多黏菌(Polym

2、yxa graminisL.)進(jìn)行傳播。本論文測(cè)定了山東泰安、臨沂兩個(gè)WYMV分離物的全基因組序列，分析了WYMV的遺傳進(jìn)化特點(diǎn)，繪制了其蛋白的互作圖譜，明確了P1蛋白的互作結(jié)構(gòu)域，確定WYMV蛋白在本氏煙表皮細(xì)胞的定位。本研究結(jié)果如下：
　?、懦齪loy(A)外，WYMV泰安、臨沂兩個(gè)分離物的RNA1全長(zhǎng)均為7635nt，RNA2為3651nt。依據(jù)RNA1和RNA2的ORF序列構(gòu)建的系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)中，WYMV均分為2個(gè)組（Ⅰ和Ⅱ）

3、，其中Ⅰ組均可以再分為2個(gè)亞組(Ⅰa和Ⅰb)。泰安的RNA1 ORF均被聚類到Ⅱ組， RNA2 ORF聚類到Ⅰb亞組，臨沂分離物的RNA1ORF和RNA2 ORF均聚類到Ⅱ組。
　?、仆ㄟ^(guò)酵母雙雜交發(fā)現(xiàn)P3NPIPO、7K、CI、VPg、NIa-Pro、CP、P1能夠發(fā)生自身互作;P3能夠和CP、Nib互作，P3NPIPO除自身互作外，能夠和14K、NIb、CP互作;7K除自身互作外，還能夠和P1、P2、CI、14K、NIb、CP

4、互作;CI除自身互作外，能與7K、NIa-Pro、CP互作;14K能與P3NPIPO、7K、VPg、NIa-Pro、P2、NIb互作; VPg除自身互作外，還可以和14K、NIb、CP、P1互作。NIa-Pro能與自身互作，還與CI、14K、CP互作。NIb能與除CI、NIa-Pro、NIb和P1外的蛋白互作，CP除能夠自身互作外，還能夠和除14K以外的其他蛋白進(jìn)行互作;P1除自身互作外，還與7K、CP、VPg、P2互作;P2與7K、1

5、4K、NIb、CP、P1均能夠互作，且部分蛋白之間在酵母中的互作具有方向性。通過(guò)酵母雙雜交和BiFC實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步明確了P1自身互作的結(jié)構(gòu)域在P1的N-端(1～86aa)，而且是N-端與N-端的互作。
　?、菍YMV各蛋白與GFP融合表達(dá)，在植物煙草表皮細(xì)胞觀察綠色熒光的分布，發(fā)現(xiàn)NIb定位于細(xì)胞核中，P2散布于細(xì)胞質(zhì)中，且定位于細(xì)胞之中網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)上;P1，CP在細(xì)胞質(zhì)形成小囊泡;P3、CI分布于細(xì)胞質(zhì)中以及質(zhì)膜上;NIa-Pro、