青海蠶豆、豌豆病毒病調(diào)查和菜豆黃花葉病毒（BYMV）全系列分析.pdf

1、青海省是我國蠶豆和豌豆主要產(chǎn)地。病毒病是該地蠶豆和豌豆上的重要病害。2005年和2006年，中國和澳大利亞兩國科研人員在青海的7個市縣進行了蠶豆和豌豆病毒病田間調(diào)查，同時對所采樣本進行了組織印跡免疫法(Tissue blot immLlrloassav，TBIA)檢測，共檢測到3種病毒，其中菜豆黃花葉病毒(Bean yellow mosaic virus BYMV)是最主要的病原。 本研究以BYMV的7個中國青海蠶豆分離物和1個

2、豌豆分離物侵染的葉片總RNA為模板，利用BYMV登錄的序列設(shè)計了一對特異性引物，RT-PCR擴增獲得了長度為1071bp的目標(biāo)片段。對目的片段進行了純化回收、連接、轉(zhuǎn)化、篩選并測序。序列分析顯示此片段中包含822bp的CP序列，編碼273個氨基酸。8個分離物的CP基因核苷酸和推導(dǎo)編碼蛋白質(zhì)的氨基酸序列的同源性分別為99.0％～99.9％和99.35％～100.0％。與18個BYMV外殼蛋白進行序列同源性和系統(tǒng)進化樹分析的結(jié)果表明，8個分

3、離物的核苷酸和氨基酸的同源性分別為83.69％～99.9％和90.1％～100％。BYMV中國青海蠶豆分離物與中國云南蠶豆分離物同源性最高；卵的序列特征揭示，在BYMV中病毒的蚜傳相關(guān)基序為NAG。 通過6次RT-PCR得到了BYMV青海分離物(9-16)基因組的全序列，這是國內(nèi)關(guān)于此病毒基因組全序列的首次報道。序列分析結(jié)果表明：9-16全序列共9547個核苷酸，5'-和3'-非翻譯區(qū)序列分別為205和174個核苷酸，中間為91

4、68個核苷酸的開放讀框，編碼一個長為3056個氨基酸、分子量約為352.6 kD的多聚蛋白。此病毒基因組及其所編碼的多聚蛋白的大小與其它馬鈴薯Y病毒屬病毒較為相近。多聚蛋白含有9個可能的蛋白酶切位點，切割后產(chǎn)生的成熟蛋白產(chǎn)物中具有保守的氨基酸基序，這與其它potyviruses都非常相似。在10個蛋白產(chǎn)物中，3'-NTR、NIb和CP相對保守，而5' -NTR、Pl和P3變異最大。 將BYMV用摩擦接種的方法分別接種蠶豆和豌豆幼