番茄黑環(huán)病毒和建蘭花葉病毒檢測方法的研究.pdf

1、番茄黑環(huán)病毒(Tomato black ring nepovirus， TBRV)和建蘭花葉病毒(Cymbidium mosaic virus，CymMV)是我國進(jìn)境植物檢疫法規(guī)中明確規(guī)定的危險性有害生物。目前，國內(nèi)在兩種病毒的檢疫檢測方法如生物學(xué)檢測、電鏡檢測、血清學(xué)檢測、分子生物學(xué)以及分子檢測方法的靈敏度的報道相對比較少。本文就兩種病毒的檢疫檢測方法進(jìn)行研究，取得了以下的成果。 1采用番茄黑環(huán)病毒(TBRV)的五個株系，對番

2、茄黑環(huán)病毒的生物學(xué)、血清學(xué)、電鏡觀察、分子生物學(xué)以及分子生物學(xué)靈敏度的進(jìn)行研究。研究結(jié)果表明：通過汁液摩擦接種的方法接種幾種鑒別寄主，篩選出檢測TBRV的一套鑒別寄主。 2建立了TBRV酶聯(lián)免疫吸附檢測方法；首次建立了TBRV的免疫電鏡觀察方法，在血清學(xué)檢測陽性的樣品中可清楚觀察到病毒粒子，病毒粒子球形。 3根據(jù)國際基因庫中已公布的TBRV的外殼蛋白基因和運(yùn)動蛋白基因，設(shè)計了4對特異性引物，首次建立了TBRV的反轉(zhuǎn)錄聚合

3、酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)和免疫捕獲反轉(zhuǎn)錄(IC-RT-PCR)檢測方法；選取了TBRV的3個分離物的保守區(qū)段，設(shè)計了特異性引物和MGB探針，建立了TBRV的實(shí)時熒光PCR檢測方法；采用質(zhì)粒稀釋梯度的方法來進(jìn)行TBRV的分子生物學(xué)的靈敏度檢測，靈敏度檢測結(jié)果表明：能檢測TBRV最低病毒量為：10<'-8>ug/ml水平，與普通的PCR相比，檢測的靈敏度提高了100倍。 4根據(jù)已經(jīng)公布的CymMV的外殼蛋白的序列設(shè)計了兩對引物，采