地黃花葉病毒生物學(xué)特性及主要基因原核表達(dá)研究.pdf

1、地黃花葉病毒(Rehmanniamosaicvirus,ReMV)是地黃上發(fā)生的一種新病毒，屬于煙草花葉病毒屬(Tobamovirus)成員，其全基因組核苷酸序列與煙草花葉病毒(TMV)的相似性最高。目前對(duì)于ReMV的主要基因功能、生物學(xué)特性以及與TMV的差異還知之甚少。為了明確ReMV主要基因的功能以及ReMV與TMV的差異，本項(xiàng)研究在大腸桿菌中高效表達(dá)了ReMV的外殼蛋白(CP)和移動(dòng)蛋白(MP)基因，制備了外殼蛋白的特異性抗體；測(cè)

2、定了ReMV在一些寄主植物上的癥狀表現(xiàn)，并與TMV進(jìn)行了初步的比較，為進(jìn)一步研究該病毒主要基因的功能奠定了基礎(chǔ)。 利用基因工程方法，將ReMV的CP基因和MP基因分別克隆到原核表達(dá)載體pET-30a(+)上，成功構(gòu)建了原核表達(dá)載體pETCP和pETMP。SDS-PAGE分析表明，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)，CP基因和MP基因在大腸桿菌BL21(DE3)pLysS中得到了高效表達(dá)，分別產(chǎn)生了預(yù)期的17.5kDa：和30kDa的特異性條帶。以表

3、達(dá)的外殼蛋白為抗原，免疫家兔，制備了外殼蛋白的特異性抗血清。ACP-ELISA檢測(cè)結(jié)果表明，制備的抗血清在稀釋成1:6000倍后仍可用于地黃花葉病毒樣品的檢測(cè)。 對(duì)ReMV在寄主植物上的癥狀表現(xiàn)進(jìn)行了測(cè)定，結(jié)果表明，ReMV可以侵染茄科、番杏科、十字花科和藜科等4科10種植物，其中在茄科的心葉煙、黃花煙、蔓陀羅；番杏科的番杏；藜科的莧色藜和昆諾藜上表現(xiàn)為局部枯斑癥狀。在紅花煙、普通煙、番茄和白菜等植物上表現(xiàn)為系統(tǒng)花葉癥狀。與TM