地黃花葉病毒（Rehmannia mosaic virus，ReMV）基因組結(jié)構(gòu)及生物學特性研究.pdf

1、地黃花葉病毒(Rehmanniamosaicvirus；ReMV)是本實驗室從地黃上分離鑒定到的一種煙草花葉病毒屬(Tobamovirus)可能的新病毒。本項研究在以往工作的基礎上，對ReMV基因組5'端和3'端序列進行了測定，確定了基因組全序列，對基因組結(jié)構(gòu)進行了分析，進一步明確了該病毒的地位。在此基礎上，對該病毒的寄主范圍、鈍化溫度、稀釋限點、粒子形態(tài)等特性進行了研究。 利用RACE-PCR方法獲得了ReMV5'端71個核苷

2、酸和3'端204個核苷酸的非編碼區(qū)序列。最終確定了ReMV基因組全序列，結(jié)果表明：ReMV基因組全長6395個核苷酸(nt)，5'端非編碼區(qū)含有71個核苷酸(nt)，3'端含有204個核苷酸(nt)；共有四個開放閱讀框架(ORF)，分別編碼126KD蛋白、183KD蛋白、運動蛋白(MP)和外殼蛋白(CP)。126KD蛋白ORF起始于72nt處，終止于3422nt處；183KD蛋白ORF與126KD蛋白ORF起始于基因組中的同一個位置(第

3、72nt處)終止于4922nt處；運動蛋白(MP)ORF起始于4906nt處，終止于5709nt處；外殼蛋白(CP)起始于5712nt處，終止于6191nt。ReMV與TMV-U1株系的核苷酸序列相似性最高，基因組全長序列相似性為83％，與Tobamovirus屬其它病毒基因組全長序列相似性在45％-78％之間；126kD蛋白基因與Tobamovirus屬其它病毒的核苷酸序列相似性在44％-82％，氨基酸序列相似性在32％-93％之間；

4、183kDa蛋白基因與Tobamovirus屬其它病毒的核苷酸序列相似性在48％-83％之間，氨基酸序列相似性在43％-94％之間；MP基因與Tobamovirus屬其它病毒MP基因的核苷酸序列相似性在36％-80％之間，氨基酸序列相似性在19％-85％之間；CP基因與Tobamovirus屬其它病毒CP基因的核苷酸序列相似性在41％-85％之間，氨基酸序列相似性在34％-94％之間；5'端和3'端核苷酸序列與Tobamovirus屬其

5、它病毒5'端和3'端核苷酸序列的相似性分別在52％-92％和51％-94％之間。對ReMV基因組結(jié)構(gòu)的分析結(jié)果表明，ReMV的MP和CPORF被兩個核苷酸間隔開，因此ReMV屬于Tobamovirus病毒亞組I的成員，病毒裝配位點位于MP基因的ORF內(nèi)。 根據(jù)Gibbs等人提出的Tobamovirus屬病毒的分類描述和鑒定依據(jù)，對ReMV的“4404-4450motif”與Tobamovirus屬其它病毒進行了分析比較，發(fā)現(xiàn)Re

6、MV的“4404-50motif”與Tobamovirus屬的特異性保守位點完全一致，說明ReMV屬于Tobamovirus病毒；但ReMV的“4404-50motif”既不同于TMV和ToMV，也不同于其它30種已知的Tobamovirus病毒或分離物，說明ReMV可能是Tobamovirus屬病毒的一個新種。 對ReMV的純化方法和生物學特性進行了研究。結(jié)果表明，ReMV粒子形態(tài)為桿狀，可以侵染茄科、豆科、番杏科、十字花科和