中國蜂膠化學(xué)組成的UPLC分析及其醇提物包埋和表征.pdf

1、蜂膠是由蜜蜂采集植物的嫩芽和分泌物并加入蜂蠟和酶混合加工而成的黏性材料。因其豐富的生物活性被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、化妝品等行業(yè)。蜂膠的生物活性取決于化學(xué)成分，而來源不同的蜂膠又因膠源植物、生態(tài)環(huán)境、生產(chǎn)季節(jié)、提取方式等的不同，導(dǎo)致化學(xué)成分存在種類和含量的差異。目前蜂膠化學(xué)成分大多采用HPLC分析，存在分析耗時長、洗脫溶劑量大、精密度不夠高等問題；蜂膠利用中存在醇提取物氣味濃烈、易氧化變質(zhì)、水溶性差、醇提后殘渣無二次利用等缺陷，造成了蜂膠

2、的應(yīng)用范圍受限、貯存性能不佳和貨架期短等問題。為建立更為快速、高效的蜂膠檢測方法，以及改進(jìn)蜂膠提取物應(yīng)用性能，本文采用超高壓液相色譜（UPLC）分析了不同來源蜂膠水提物（WEP）和樹膠水提物（WEG）的化學(xué)組成，UPLC-Q-TOF-MS分離鑒定蜂膠醇提物(EEP)和WEP中的未知物；分別采用薄膜超聲—動態(tài)高壓法和乳化/內(nèi)部凝膠—復(fù)凝聚法獲得EEP脂質(zhì)體和EEP微膠囊，并對其進(jìn)行了表征。具體研究結(jié)果如下：
　　(1)使用Agile

3、nt ZORBAX Eclipse Plus C18色譜柱(2.1mm×50mm×1.8μm)，0.1％甲酸-甲醇流動相，洗脫時間20min，檢測波長256和280nm的UPLC分析方法，同時測定31種WEP、2種WEG、8種EEP和8種蜂膠醇提后殘渣再水提物(WEP-R)中的25種酚類化合物含量。通過UPLC分析31種WEP和2種WEG獲得的全部色譜信息進(jìn)行線性判別分析（LDA）。研究結(jié)果表明：不同地區(qū)WEP所含對照品的種類和含量差異

4、很大，70%以上WEP中存在p-香豆酸、3,4-二甲氧基肉桂酸、肉桂酸、柚皮素、咖啡酸、阿魏酸、生松素、兒茶素、表兒茶素和白楊素等物質(zhì)；海南WEP的圖譜與其它地區(qū)圖譜相似度最低。WEP-R中仍可鑒定出咖啡酸、p-香豆酸、阿魏酸、肉桂酸、柚皮素等多種物質(zhì)。通過LDA可以將不同顏色和不同地理分區(qū)WEP和WEG進(jìn)行良好區(qū)分。
　　(2)UPLC-Q-TOF-MS結(jié)果結(jié)合已有文獻(xiàn)和相關(guān)數(shù)據(jù)庫，對31種不同地區(qū)蜂膠的EEP和WEP混合物進(jìn)行

5、分析推斷出18種物質(zhì)，其中包括咖啡酸、生松素、白楊素這3種通過UPLC分析已鑒定出的物質(zhì)，還有15種物質(zhì)通過精確分子量和質(zhì)譜碎片推斷其可能的分子式。
　　(3)以大豆卵磷脂和膽固醇為膜材，采用薄膜分散—動態(tài)高壓技術(shù)制備EEP脂質(zhì)體，通過粒度分析儀、透射電子顯微鏡、清除DPPH自由基、低溫儲存試驗(yàn)進(jìn)行性狀表征。研究結(jié)果表明，脂質(zhì)體粒徑78±14nm，包埋率97.80±5.21%，形狀為大小均勻球形，EEP穩(wěn)定性參數(shù)為2.53±0.0

6、5%，4℃下分別保存3、6個月后包埋率分別下降了16.74%和28.77%，分散系數(shù)分別增加了6.61%和14.32%，DPPH自由基清除指數(shù)AAI分別為2.78、2.71；HPLC分析貯存180d后EEP脂質(zhì)體中7種物質(zhì)變化分別為1.08%~6.63%，低于EEP的5.55%~19.42%，有效保護(hù)EEP生物活性。
　　(4)采用乳化/內(nèi)部凝膠化-復(fù)凝聚技術(shù)制備載EEP的海藻酸鈉-殼聚糖微膠囊，利用粒度分析儀、激光共聚焦顯微鏡、

7、紅外光譜儀和X射線衍射儀分析、體外釋放實(shí)驗(yàn)、加速實(shí)驗(yàn)表征微膠囊性狀。研究結(jié)果表明，微膠囊粒徑大小為265±25nm，包埋率和載藥率達(dá)到72.80±3.8%和19.96±2.4%，形狀為大小均勻球體；紅外光譜和X射線衍射分析結(jié)果表明海藻酸鈉和殼聚糖反應(yīng)形成微膠囊；模擬胃液和腸液條件下體外釋放8h釋放率46.60±0.80%，HPLC分析加速實(shí)驗(yàn)EEP脂質(zhì)體中7種物質(zhì)含量變化為14.01%～39.68%，低于EEP中37.01%～77.45

8、%。制得的微膠囊粒徑小、穩(wěn)定性良好、釋放率符合腸溶體系要求、對EEP內(nèi)活性物質(zhì)起保護(hù)作用。
　　綜上所述，UPLC可以快速分析蜂膠化學(xué)組成，采用醇提和水提結(jié)合的方式可以充分利用蜂膠有效成分，LC-MS分析EEP和WEP混合物可以更全面了解蜂膠化學(xué)成分，為蜂膠的進(jìn)一步開發(fā)利用提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)；EEP脂質(zhì)體和微膠囊的制備，解決了蜂膠貯存不穩(wěn)定性的難題，可以作為新型載藥系統(tǒng)用于控制和持續(xù)釋放藥物；它有效封裝有效成分并實(shí)現(xiàn)緩釋，可以更廣泛地應(yīng)