16539.新型混合模式色譜強(qiáng)化抗體純化的研究

1、新型混合模式色譜強(qiáng)化新型混合模式色譜強(qiáng)化抗體純化的研究抗體純化的研究Improvedpurificationofantibodybynovelmixedmodechromatography學(xué)科專業(yè)：生物化工研究生：柴東升指導(dǎo)教師：史清洪副教授天津大學(xué)化工學(xué)院二零一三六月中文摘要中文摘要本文以兔抗人T淋巴細(xì)胞免疫血清（RATS）和抗天花兔免疫血清（ASRS）中γ球蛋白的純化為目標(biāo)，采用烯丙基溴活化法對(duì)SepharoseFastFlow介質(zhì)

2、進(jìn)行活化，并進(jìn)一步偶聯(lián)配基4(1H咪唑1基)苯胺（AN）得到了一系列不同配基密度的混合模式色譜介質(zhì)ANSepharoseFastFlow。利用制備獲得的多種不同配基密度的ANSepharoseFastFlow介質(zhì)，本文考察了配基密度對(duì)于γ球蛋白和BSA在ANSepharoseFastFlow介質(zhì)上吸附行為的影響，確定了適宜γ球蛋白分離的配基密度范圍。吸附平衡結(jié)果表明，介質(zhì)對(duì)γ球蛋白的吸附存在臨界配基密度，當(dāng)AN配基密度高于25mmolL

3、后，ANSepharoseFastFlow對(duì)γ球蛋白有較高的親和性和吸附容量。當(dāng)配基密度在25~30mmolL時(shí)，ANSepharoseFastFlow對(duì)γ球蛋白具有較高的選擇性，同時(shí)，這種吸附行為表現(xiàn)出良好的耐鹽特性。在此基礎(chǔ)上，本文進(jìn)一步考察了γ球蛋白和BSA在ANSepharoseFastFlow介質(zhì)上的動(dòng)態(tài)吸附性能。γ球蛋白的動(dòng)態(tài)吸附容量結(jié)果顯示，在臨界配基密度以上ANSepharoseFastFlow具有與商品化MEPHype

4、rCel和MabSuRe介質(zhì)相當(dāng)?shù)奈饺萘坎⑶医橘|(zhì)具有良好的重復(fù)使用性能。以RATS和ASRS為原料，利用合成的不同配基密度的色譜介質(zhì)ANSepharoseFastFlow從上述原料對(duì)目標(biāo)γ球蛋白進(jìn)行純化實(shí)驗(yàn)，并與商品化MEPHyperCel和MabSuRe介質(zhì)的純化效果進(jìn)行比較。結(jié)果表明ANSepharoseFastFlow介質(zhì)的γ球蛋白色譜分離工藝獲得的γ球蛋白產(chǎn)品的純度達(dá)到了商品化MEPHyperCel和MabSuRe介質(zhì)的水平，

5、配基密度在25mmolL時(shí)，RATS純化實(shí)驗(yàn)的純度可達(dá)到88.9%，同時(shí)收率達(dá)到80.4%。在此基礎(chǔ)上，本文提出了多柱連續(xù)吸附分離γ球蛋白的色譜方法，顯著地提高了γ球蛋白產(chǎn)品的純度和收率。配基密度在30mmolL時(shí)，ANSepharoseFastFlow對(duì)RATS純化實(shí)驗(yàn)的γ球蛋白純度由單柱的61.2%提高到79.9%；同時(shí)，MEPHyperCel對(duì)RATS的純化純度由單柱的85.6%提高到97.2%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明混合模式色譜介質(zhì)ANS