毛細管電泳和混合模式色譜在藥物分析中的應(yīng)用.pdf

1、毛細管電泳（capillary electrophoresis, CE）技術(shù)的快速發(fā)展給分析工作者帶來了新的機遇和挑戰(zhàn)。CE具有快速、經(jīng)濟、分離效率高等優(yōu)點，廣泛應(yīng)用于分離有機小分子、無機離子、多肽和蛋白質(zhì)等物質(zhì)的分離。此外，作為高效液相色譜指紋圖譜的補充，中藥CE指紋圖譜的建立有利于中藥質(zhì)量的控制和真?zhèn)蝺?yōu)劣的鑒別。通過在線富集（場放大樣品堆積、大體積樣品堆積、吹掃法等），CE的靈敏度可以得到較大的提高，更好地應(yīng)用于痕量相關(guān)物質(zhì)的檢測。

2、
　　混合模式色譜（mixed-mode chromatography, MMC）選擇性好、載樣量高，可為分析物的保留提供多重機理，在復(fù)雜樣品的分離分析中表現(xiàn)出較大的潛力。其固定相的研究是色譜領(lǐng)域的熱點之一。
　　本論文著手于藥學(xué)研究中復(fù)雜樣品的分析，分別對CE和MMC這兩種分離方法進行了一定的研究。主要包括以下四部分內(nèi)容：
　　1.建立了水蛭的CE指紋圖譜。系統(tǒng)考察了水蛭的提取條件及緩沖體系種類、濃度和pH值等因素對

3、水蛭CE指紋圖譜的影響。最優(yōu)的提取條件是以生理鹽水為提取溶劑，攪拌3h；最優(yōu)的電泳條件為：以含有0.5mM十六烷基三甲基溴化銨（CTAB）的100mM（pH=10.0）磷酸鹽為緩沖溶液，分離電壓-15kV，重力進樣40s（12cm高度）。在最優(yōu)條件下，以日本醫(yī)蛭為對象，進行了日內(nèi)和日間精密度試驗、重復(fù)性試驗及穩(wěn)定性試驗，所有共有指紋峰的相對保留時間和相對保留峰面積的RSD≤5％，同時穩(wěn)定性試驗表明日本醫(yī)蛭樣品溶液在72h內(nèi)穩(wěn)定。以上方法

4、學(xué)考察表明，該方法快速、簡便、重現(xiàn)性好、靈敏度高、可靠、日內(nèi)和日間精密度良好，適合于水蛭CE指紋圖譜的研究。該方法可用于日本醫(yī)蛭、寬體金線蛭、尖細金線蛭及菲牛蛭CE指紋圖譜的建立，還可用于水蛭產(chǎn)地及種類的鑒別。
　　2.采用場放大-大體積進樣CE法檢測甲磺酸伊馬替尼及相關(guān)化合物。系統(tǒng)優(yōu)化了添加劑的種類和濃度、緩沖液的pH值、有機添加劑的比例、進樣方式、進樣電壓和時間等因素，得到最優(yōu)的電泳條件如下：10mM NaH2PO4（pH=2

5、.0）緩沖液；5mM2-羥丙基-β-環(huán)糊精為添加劑；檢測波長為267nm；分離電壓為20kV。在20min內(nèi)完成甲磺酸伊馬替尼和代謝物N-去甲伊馬替尼以及相關(guān)雜質(zhì)的分離。在此基礎(chǔ)上，采用場放大-大體積進樣技術(shù)提高靈敏度，以甲醇：0.5M HCl（6:4, v:v）作為樣品溶液的稀釋溶劑，電動進樣（15kV×60s）。該方法線性范圍較寬、日內(nèi)和日間精密度均較好，并且簡便、有效、經(jīng)濟，可用于甲磺酸伊馬替尼的質(zhì)量控制及代謝研究，該方法也為甲磺

6、酸伊馬替尼類似物的分離分析提供了一種新方法。
　　3.制備了一種新型的MMC兩性離子固定相，并進行了系統(tǒng)的色譜評價及應(yīng)用研究。在親水模式下，靜電吸附力/排斥力、分配和氫鍵作用力為主要作用力，可分離一系列極性和離子型分析物。相比于反相液相色譜（reversed-phase liquid chromatography,RPLC），黃柏提取液在該色譜柱上能夠得到更好的分離。結(jié)果表明，該色譜柱在復(fù)雜樣品的分離中具有良好的分離性能。