高效毛細(xì)管電泳指紋圖譜在中藥研究中的應(yīng)用

1、高效毛細(xì)管電泳指紋圖譜在中藥研究中的應(yīng)用 高效毛細(xì)管電泳指紋圖譜在中藥研究中的應(yīng)用摘要：以中藥指紋圖譜質(zhì)量控制特征為基礎(chǔ),綜述了毛細(xì)管電泳在中藥指紋圖譜方面應(yīng)用的基礎(chǔ)理論和方法。介紹了毛細(xì)管電泳指紋圖譜的優(yōu)勢(shì),毛細(xì)管電泳指紋圖譜的研究方法與評(píng)價(jià)方法及其在中藥質(zhì)量控制中的應(yīng)用。關(guān)鍵詞：毛細(xì)管電泳；指紋圖譜；毛細(xì)管電泳-質(zhì)譜聯(lián)用；中藥；應(yīng)用The application of capillary electrophoresis finger

2、prints of traditional Chinese medicinesAbstract:To review the basic theories and methods of capillary electrophoresis fingerprint (CEFP) of traditional Chinese medicines based on quality controlled characteristics of tra

3、ditional Chinese medicine fingerprint. The advantages of CEFP were introduced, and the research and appraisal method of CEFP for traditional Chinese medicine were also discussed.Key words: capillary electrophoresis (CE);

4、 chromatographic fingerprints; capillary electrophoresis-mass spectrometry (CE-MS); traditionalChinese medicines (TCMs); application任何藥物都必須安全、有效。隨著中藥在世界各地的影響和應(yīng)用日益廣泛,人們對(duì)中藥的安全性、有效性、穩(wěn)定性提出了更高的要求,但中藥的質(zhì)量控制一直是制約中藥現(xiàn)代化與出口的“瓶頸”。在我

5、國(guó),眾多的科研工作者致力于中藥質(zhì)量控制方法的研究,其中色譜法的應(yīng)用取得了可喜的成績(jī)[1,2]。僅以《中華人民共和國(guó)藥典》2005 版一部[3]為例,用薄層色譜法(TLC)鑒別的品種達(dá) 1523 項(xiàng),用于含量測(cè)定的 45 項(xiàng);用高效液相色譜法(HPLC)測(cè)含量的品種達(dá) 479 種,涉及 518 項(xiàng);用氣相色譜法(GC)鑒別和進(jìn)行含量測(cè)定的有 47 種。與 2000 版中國(guó)藥典比較,采用TLC,HPLC 及 GC 鑒別的品種分別大幅度增加了

6、 866,413 及 37 項(xiàng)?？梢?jiàn)色譜法在中藥質(zhì)量控制中應(yīng)用之廣泛。雖然中藥的質(zhì)量控制有了很大的進(jìn)步,但由于中藥的成分極其復(fù)雜,中成藥則尤甚,更由于其療效是基于中藥物質(zhì)群的整體作用,因此對(duì)少數(shù)成分的定性、定量,不足以代表中藥質(zhì)量的總體表征。在這種情況下,合成了一種經(jīng)隨機(jī)聚合產(chǎn)生的多氨基和多羧基的混合物,即載體兩性電解質(zhì),可用其分離等電點(diǎn)差異達(dá) 0.01 pH 的蛋白質(zhì)。1985 年 Hjerten 和 Zhu[7]將該法引入毛細(xì)管電泳

7、中,發(fā)展了基于等電點(diǎn)不同而分離的毛細(xì)管等電聚焦電泳(capillary isoelectric focusing, CIEF),它結(jié)合了常規(guī)等電聚焦電泳(IEF)的高分離能力和現(xiàn)代毛細(xì)管電泳的特點(diǎn),使其成為分離蛋白質(zhì)的重要方法之一。1987 年 Cohen 和Karger[8]提出了基于分子量大小篩分機(jī)制的毛細(xì)管凝膠電泳(capillary gel electrophoresis, CGE)。1981 年 Jorgenson 和 Lu

8、ckacs[9]在 170μm 內(nèi)徑的毛細(xì)管中填充了 10μm 的 Partisil ODS-2,在電場(chǎng)作用下成功地分離了 9-甲基蒽和芘，獲得了 3·1 萬(wàn)理論塔板數(shù)的柱效,并指出在以電滲流作推動(dòng)力的情況下,固定相的填充不規(guī)則性對(duì)樣品區(qū)帶展寬并不重要，這種技術(shù)被稱(chēng)為電色譜(capillary electrochroma tography, CEC)。電色譜在 90 年代得到了迅速發(fā)展,是毛細(xì)管電泳與色譜法相結(jié)合的產(chǎn)物,具有電

9、場(chǎng)力與液壓 2 種驅(qū)動(dòng)力,是被認(rèn)為最有前途的新分析方法。它是在毛細(xì)管中填充或毛細(xì)管壁涂布、鍵合色譜固定相，依靠電滲流及液壓推動(dòng)流動(dòng)相，使中性的和帶電荷的樣品分子根據(jù)它們?cè)谏V固定相和流動(dòng)相間分配系數(shù)不同而實(shí)現(xiàn)分離的一種電分離模式。1990 年瑞士 Ciba-Geigy 公司的 Manz 和 Widmer 首次提出微全分析系統(tǒng)( Miniaturized total chemical analysis system,μ-TAS )的

10、概念和設(shè)計(jì)[9-11],自此微型化、集成化和自動(dòng)化的芯片毛細(xì)管電泳技術(shù)獲得了重要發(fā)展。1.3 基本原理和分析特點(diǎn)HPCE 是以高壓電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力,以毛細(xì)管為分離通道,依據(jù)樣品中各組分之間的淌度和分配行為的差異而實(shí)現(xiàn)分離的一類(lèi)液相分離技術(shù)。儀器裝置通常包括高壓電源、進(jìn)樣系統(tǒng)、毛細(xì)管柱、檢測(cè)器和記錄系統(tǒng) 5 部分,其中毛細(xì)管柱是分離的核心部分。研究與實(shí)踐表明,HPCE 與高效液相色譜(HPLC)相比具有以下特點(diǎn):(1)分離效率高,理論塔板數(shù)高