動(dòng)物藥材商品高效毛細(xì)管電泳指紋圖譜的研究(Ⅰ).pdf

1、目的：
　　 1.建立動(dòng)物藥材商品的高效毛細(xì)管電泳（HPCE）指紋圖譜測(cè)定方法。
　　 2.應(yīng)用高效毛細(xì)管電泳（HPCE）指紋圖譜，建立動(dòng)物藥材商品的品質(zhì)評(píng)價(jià)模式。
　　 材料與方法：
　　 1.材料:10批不同地區(qū)地龍、土鱉蟲(chóng)（地鱉）、僵蠶、蜈蚣、蛤蚧、蘄蛇、烏梢蛇藥材商品，地鱉和冀地鱉對(duì)照藥材。
　　 2.方法
　　 2.1樣品的處理：各待測(cè)樣品均以水或稀醇為提取溶劑，超聲提取。

2、>　　 2.2儀器與試劑：美國(guó)Agilent3D毛細(xì)管電泳儀，DAD檢測(cè)器，Agilent化學(xué)工作站。AS5150A超聲波清洗器；TDL-5-A離心機(jī)；AR2140電子分析天平。所用試劑均為市售分析純，水為三級(jí)水；所用試劑均通過(guò)0.45μm微孔濾膜濾過(guò)。
　　 2.3電泳條件：毛細(xì)管內(nèi)徑分別為50、75μm，有效長(zhǎng)度40～65cm；緩沖體系為硼砂-硼酸、硼砂；pH值在8～10之間；電壓在12～25KV之間；柱溫為25□；進(jìn)樣方

3、式為壓力進(jìn)樣；檢測(cè)器為紫外DAD檢測(cè)器。
　　 2.4指紋圖譜建立：將各樣品HPCE測(cè)試譜圖，導(dǎo)入中藥指紋圖譜計(jì)算機(jī)輔助相似度計(jì)算軟件，分別擬合出各藥材指紋圖譜的對(duì)照指紋圖譜R，然后計(jì)算各樣品與其對(duì)照指紋圖譜R的相似度。
　　 結(jié)果：
　　 1.以30mmol/L硼砂為緩沖溶液，pH9.45，分離電壓15kV，柱溫25℃，檢測(cè)波長(zhǎng)250nm，測(cè)定地龍藥材商品HPCE指紋圖譜，得到8個(gè)共有峰，保留時(shí)間分別為3.98

4、5、4.804、5.259、6.255、6.641、6.793、7.537、7.967，各樣品相對(duì)于對(duì)照?qǐng)D譜的相似度分別為0.846、0.912、0.719、0.959、0.859、0.932、0.874、0.948、0.949、0.940、0.849、0.853、0.899、0.868、0.928、0.966、0.821、0.968、0.868、0.791、0.825。
　　 2.以20mmol/L硼砂為緩沖溶液，pH9.44

5、，分離電壓13kV，柱溫25℃，檢測(cè)波長(zhǎng)265nm，測(cè)定土鱉蟲(chóng)藥材商品HPCE指紋圖譜，得到6個(gè)共有峰，保留時(shí)間分別為4.336、4.76、5.293、6.189、8.107、8.191，各樣品相對(duì)于對(duì)照藥材圖譜的相似度分別為0.962、0.966、0.997、0.987、0.963、0.950、0.958、0.975、0.982、0.970。
　　 3.以30mmol/L硼砂-0.2mol/L硼酸為緩沖溶液，pH8.6，分離電

6、壓18KV，柱溫25℃，檢測(cè)波長(zhǎng)245nm，測(cè)定僵蠶藥材商品HPCE指紋圖譜，得到8個(gè)共有峰，保留時(shí)間分別為6.663、7.152、7.305、7.51、8.054、10.925、12.751、13.254，各樣品相對(duì)于對(duì)照?qǐng)D譜的相似度分別為0.997、0.992、0.996、0.973、0.992、0.998、0.996、0.994、0.959、0.982。
　　 4.以40mmol/L硼砂-0.2mol/L硼酸為緩沖溶液，p

7、H8.9，分離電壓20KV，柱溫25℃，檢測(cè)波長(zhǎng)256nm，測(cè)定蜈蚣藥材商品HPCE指紋圖譜，得到7個(gè)共有峰，保留時(shí)間分別為6.014、7.515、8.93、10.158、12.232、12.458、14.808，各樣品相對(duì)于對(duì)照?qǐng)D譜的相似度分別為0.948、0.981、0.875、0.957、0.883、0.949、0.859、0.956、0.967、0.849。
　　 5.以10mmol/L硼砂-1％乙腈為緩沖溶液，pH9.

8、18，分離電壓20kV，柱溫25℃，檢測(cè)波長(zhǎng)245nm，測(cè)定蛤蚧藥材商品HPCE指紋圖譜，得到7個(gè)共有峰，保留時(shí)間分別為4.865、6.004、6.348、7.064、8.386、8.692、8.846，各樣品相對(duì)于對(duì)照?qǐng)D譜的相似度分別為0.974、0.987、0.967、0.963、0.976、0.990、0.910、0.96l、0.979、0.526。
　　 6.以20mmol/L硼砂-0.2mol/L硼酸為緩沖溶液，pH8

9、.4，分離電壓19kV，柱溫25℃，檢測(cè)波長(zhǎng)245nm，測(cè)定蘄蛇藥材商品HPCE指紋圖譜，得到7個(gè)共有峰，保留時(shí)間分別為5.908、6.31、6.461、6.758、9.063、10.331、11.174，各樣品相對(duì)于對(duì)照?qǐng)D譜的相似度分別為0.978、0.914、0.978、0.967、0.992、0.982、0.986、0.988、0.985、0.974。
　　 7.以80mmol/L硼砂-0.2mol/L硼酸為緩沖溶液，pH

10、8.8，分離電壓18KV，柱溫25℃，檢測(cè)波長(zhǎng)230nm，測(cè)定烏梢蛇藥材商品HPCE指紋圖譜，得到7個(gè)共有峰，保留時(shí)間分別為7.806、8.339、8.872、9.092、9.228、10.799、17.803，各樣品相對(duì)于對(duì)照?qǐng)D譜的相似度分別為0.961、0.865、0.891、0.987、0.927、0.942、0.986、0.923、0.914、0.982。
　　 結(jié)論：
　　 1.在本實(shí)驗(yàn)所建立的七種動(dòng)物藥材商品

11、的指紋圖譜中，土鱉蟲(chóng)、僵蠶、蘄蛇各樣品與其對(duì)應(yīng)的對(duì)照藥材或擬合的對(duì)照?qǐng)D譜比較，得到的相似度均在0.9以上，因此，可以認(rèn)為目前市場(chǎng)上土鱉蟲(chóng)、僵蠶、蘄蛇藥材商品的品種具有一致性；蜈蚣、蛤蚧、烏梢蛇藥材各樣品與其對(duì)應(yīng)擬合的對(duì)照?qǐng)D譜比較，個(gè)別樣品相似度小于0.9，但除蛤蚧（0.526）外，其他樣品的相似度都接近0.9，表明蜈蚣、烏梢蛇藥材商品的品種基本一致；在21份地龍藥材商品中，10份為廣地龍樣品，11份為滬地龍樣品，其中，廣地龍除1＃、3＃

12、樣品外，其余樣品相似度均大于0.9，表明廣地龍樣品間的相似性基本一致，而滬地龍樣品中僅4份樣品在0.9以上，4份樣品的相似度接近0.9，另3份樣品小于0.9，表明滬地龍品種來(lái)源比較復(fù)雜，與實(shí)際情況符合；但是否說(shuō)明廣地龍質(zhì)量?jī)?yōu)于滬地龍，有待進(jìn)一步研究。
　　 2.本研究發(fā)現(xiàn)，每種動(dòng)物藥材商品的指紋圖譜其相似度小于0.9的樣品，主要表現(xiàn)為各共有峰相對(duì)峰面積的差異（如蛤蚧10＃樣品的相似度為0.526，其相對(duì)峰面積顯著高于整體平均水平