高速逆流色譜分離純化海桐皮活性成分的研究.pdf

1、近年來(lái)高速逆流色譜(HSCCC)廣泛應(yīng)用于天然產(chǎn)物化學(xué)成分的分離提純。本文利用HSCCC分離技術(shù)，針對(duì)海桐皮活性成分開(kāi)展研究。探討了高速逆流色譜的最優(yōu)分離條件，并對(duì)海桐皮活性成分的抗氧化和抑菌作用進(jìn)行了相關(guān)研究。主要內(nèi)容如下:
　　(1)考察了HSCCC分離海桐皮乙酸乙酯萃取部位的最優(yōu)分離條件。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明最優(yōu)兩相溶劑體系為正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(1∶4∶1∶4，v/v)，上相有機(jī)相作固定相，下相水相作流動(dòng)相。轉(zhuǎn)速為850轉(zhuǎn)/

2、分鐘，流速為2 mL/min，此時(shí)固定相保留率達(dá)到54％。通過(guò)HSCCC一步分離，從420 mg乙酸乙酯部位中分離純化得到75 mg原兒茶酸、32 mg綠原酸和44 mg咖啡酸。高效液相色譜分析結(jié)果顯示分離后物質(zhì)的純度都超過(guò)95％，原兒茶酸的純度甚至達(dá)到了99.7％。
　　(2)采用紫外光譜(UV)、液相質(zhì)譜(HPLC-MS/MS)、核磁共振氫譜(1H NMR)和碳譜(13C NMR)方法分析鑒定出海桐皮活性成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)。本文首

3、次報(bào)道從海桐皮中分離得到原兒茶酸、綠原酸和咖啡酸這三種物質(zhì)。
　　1，1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)抗氧化實(shí)驗(yàn)表明這三種物質(zhì)均具有較好的抗氧化性，原兒茶酸、綠原酸、咖啡酸的抗氧化強(qiáng)弱為咖啡酸＞原兒茶酸＞綠原酸，其半數(shù)抑制濃度分別為22.5μg/mL、41.9μg/mL和20.9μg/mL。同時(shí)考察了三種物質(zhì)對(duì)阪琦桿菌、副溶血弧菌、鼠傷寒沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、腸桿菌的抑菌效果。結(jié)果表明原兒茶酸、綠原酸和咖啡酸的抑菌作用均

4、強(qiáng)于乙酸乙酯部位，且不同物質(zhì)對(duì)菌種的抑菌效果具有選擇性。其中原兒茶酸對(duì)副溶血菌具有較強(qiáng)抑菌作用，最低抑制濃度(MIC)為400μg/mL，而綠原酸對(duì)阪琦桿菌的抑菌效果甚佳，MIC為600μg/mL，咖啡酸對(duì)鼠傷寒沙門氏菌的MIC為600μg/mL。
　　(3)研究了正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(1∶1∶1∶1，v/v)溶劑體系中的酸效應(yīng)和鹽效應(yīng)。選擇水楊酸為研究對(duì)象，探討了不同種類的酸、鹽及它們的濃度對(duì)水楊酸分配系數(shù)的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果